[发明专利]双载体系统及其用途

说明书

本申请公开了一种用于在细菌中表达Fab抗体片段的双质粒系统，包含第一质粒和第二质粒，其中所述第一质粒包含抗体轻链(VL‑CL)表达单元，所述第二质粒包含抗体重链VH‑CH1表达单元；所述第一质粒和第二质粒包含在所述细菌中相容的不同复制原点；并且所述抗体轻链表达单元和抗体重链VH‑CH1表达单元使用相同的原核启动子。本申请还公开了所述双质粒系统的用途。

技术领域

本发明为基因工程抗体药物领域，特别是抗人IL-17的单克隆抗体领域。本发明涉及人源性功能性抗人IL-17单克隆抗体，以及这类抗体在治疗人IL-17介导的疾病中的用途。

背景技术

白细胞介素17(IL-17)家族目前包括IL-17A、IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E和IL-17F六种细胞因子。IL-17家族的成员与任何其它已知的细胞因子没有序列相似性，而且家族成员之间的序列相似性也比较低(Gaffen SL,Nat.Rev.Immunol.2009Aug；9(8):556-67)。IL-17家族成员的功能主要是参与免疫应答的调节。白细胞介素IL-17A(以下简称IL-17)是20-30kD的同源二聚体糖蛋白,其主要由活化的CD4⁺T细胞产生并作为促炎细胞因子起作用。IL-17由活化的T细胞在炎性位点分泌,而不在体循环中分泌。IL17具有多种生物学特性,包括上调黏附分子并在多种细胞类型包括滑膜细胞、软骨细胞、成纤维细胞、内皮细胞、上皮细胞、角质形成细胞和巨噬细胞中诱导产生大量炎性细胞因子和趋化因子。同样，IL-17通过诱导趋化因子的释放诱导嗜中性粒细胞聚集到炎性位点上，刺激前列腺素和金属蛋白酶的产生，并抑制蛋聚糖的合成。此外，IL-17在造血祖细胞的成熟中起重要作用。IL-17在不同的器宫和组织包括肺、关节软骨、骨、脑、造血细胞、肾、皮肤和肠中具有信号转导功能。因此，由IL-17A/Th17介导的免疫反应是全身性的，由此引发的炎症反应主要表现为中性粒细胞浸润。

大量的研究已经证实IL-17的增加与多种疾病有关，包括呼吸道炎症、类风湿性关节炎(RA)、骨关节炎、骨侵蚀、腹膜内脓肿与粘连炎症(IBD)、同种异体移植排斥、牛皮癣、某些类型的癌、血管发生、动脉粥样硬化和多发性硬化(MS)等(Witkowski等人，Cell.Mol.Life Sci.61:567-579,2004)。而且，IL-17在胶原基质分解、炎症及关节损伤等方面与IL-1b具有相对独立的效应，而且IL-17具有与TNF-a协同扩大炎症的生物学效应。进一步的研究证实，通过结合IL-17的特异性抗体或可溶性IL17受体阻断IL-17的体内生物学活性时，可以有效减少了多种动物关节炎模型中的炎症和骨侵蚀。因此，IL-17成为治疗RA和其它自身免疫性疾病的新靶标，而且由于IL17主要集中于炎症部位，因而靶向IL17的药物可能较靶向其它参与体循环的促炎细胞因子(如TNF)等具有潜在的更高安全性。

目前欧盟和美国FDA都已经批准用Novartis公司的Cosentyx治疗中重度斑块状银屑病成人患者，而Cosentyx的活性成份是secukinumab，是一种IL-17的单抗。但是本领域仍然需要更多适于治疗患者的改善的抗IL-17抗体。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新型抗人IL-17的单克隆抗体或其片段，编码该单克隆抗体或其片段的多核苷酸的载体、宿主细胞、制备和纯化该抗体的方法及临床应用。由本发明涉及的抗体基因可变区的序列，可构建全长的抗体分子作为药物用于临床上由人IL-17介导的自身免疫系统疾病使用。这些适应症包括但不局限于下列：银屑病、类风湿性关节炎或强直性脊柱炎。

本发明构建了大容量的天然人源噬菌体抗体库，从中筛选得到了全人源抗IL-17单克隆抗体。

本发明的抗体为全人源的单克隆抗体，拮抗至少一种与IL-17或其部分相关的体外或体内生物活性。

在一个实施例中，本发明抗体的特征在于对人IL-17具有强结合亲和力。