[发明专利]水稻低直链淀粉含量基因Wx-mq的分子标记特异性引物及其应用

权利要求书

1.水稻低直链淀粉含量基因Wx-mq的分子标记特异性引物，其特征在于该分子标记的上游引物WxF为SEQ ID NO.1，下游引物WxR为SEQ ID NO.2；扩增产物大小为200 bp。

2.权利要求1所述水稻低直链淀粉含量基因Wx-mq的分子标记特异性引物在用于鉴定水稻品种资源中是否含有隐形纯合的Wx-mq基因的应用。

3.权利要求1所述水稻低直链淀粉含量基因Wx-mq的分子标记特异性引物在用于提高含Wx-mq基因品种的选择效率的应用。

4.采用权利要求1所述的特异性引物进行水稻低直链淀粉含量基因Wx-mq的分子标记检测方法，其特征在于按如下的步骤进行：

（1）取水稻样品，提取水稻样品基因组DNA；

（2）利用SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的分子标记引物，对所述的水稻样品基因组DNA进行PCR扩增，PCR扩增产物在8%非变性聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳检测，扩增出200 bp的目标条带后进行Miu I限制性内切酶的检测；酶切后仅有200 bp一条条带的品种为含有纯合隐性Wx-mq突变基因的水稻品种；切出200 bp，176 bp和24 bp三条带的品种为含有杂合Wx-mq基因的水稻品系；仅切出176 bp和24 bp两条带的品种为含Wx-mq等位基因Wx-b的水稻品种（系）。

5.权利要求4所述的水稻低直链淀粉含量基因Wx-mq的分子标记检测方法，其特征在于第一步PCR反应：PCR扩增的反应体系为：总体积20mL，包括: ddH2O 12.5μL、10×Buffer(含20 mmol/L Mg2+) 2μL、10 μM引物2μL、2.5 mM dNTP 1μL、TagDNA聚合酶(2 U/μL) 0.5μL、水稻样品基因组模板DNA 2μL；

反应程序为: 94°C 10 min；94°C 30 s，60°C 30 s，72°C 30 s，30个循环；72°C 10min，取3μL扩增产物在8%非变性聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳检测，如果扩增出200 bp的分子标记DNA片段，标志着Wx-mq基因或其等位基因Wx-b的存在。

6.权利要求4所述的水稻低直链淀粉含量基因Wx-mq的分子标记检测方法，其特征在于第二步酶切反应：取10μL的PCR扩增产物，在其中加入限制性内切酶Miu I，酶切反应体系为：总体积15mL，包括: ddH2O 3μL，10´Buffer 1.5mL，PCR扩增产物10μL，限制性内切酶Miu I (10 U/μL) 0.5mL，将反应体系在37°C条件下反应5h后，酶切产物在8%非变性聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳检测，然后在白光透射仪上照相，记录结果。