[发明专利]一种从海洋球石藻中提取神经酰胺的方法

权利要求书

1.一种从海洋球石藻中提取神经酰胺的方法,其特征在于：包括以下步骤：

步骤一、制备海洋球石藻石油醚相萃取物：海洋球石藻生长至稳定期，收获，冷冻干燥获得海洋球石藻藻粉，用质量分数75％的乙醇浸提，获得乙醇浸膏，加入等体积的石油醚和水，反复萃取，收集石油醚相，合并、减压浓缩至干，获得海洋球石藻石油醚相萃取物；

步骤二、反相硅胶柱层析制备神经酰胺粗品：将获得的海洋球石藻石油醚相萃取物以反相硅胶柱进行层析处理，收集，检测、合并、减压浓缩至干，得到神经酰胺粗品；

步骤三、葡聚糖凝胶柱Sephadex LH-20层析制备神经酰胺一次精品：将获得的神经酰胺粗品以葡聚糖凝胶柱Sephadex LH-20进行层析处理，收集，检测、合并、减压浓缩至干，得到神经酰胺一次精品；

步骤四、正相硅胶柱层析制备神经酰胺二次精品：将获得的神经酰胺一次精品以正相硅胶柱进行层析处理，收集，检测、合并、减压浓缩至干，得到神经酰胺二次精品；

步骤五、PTLC制备神经酰胺：将获得的神经酰胺二次精品进行PTLC，点样、展开，刮板，样品回收，保存于-20℃，得到神经酰胺纯品：

2.如权利要求1所述的一种从海洋球石藻中提取神经酰胺的方法,其特征在于：所述步骤二中，将海洋球石藻石油醚相萃取物用适量的分析纯甲醇溶解后，进行反相硅胶柱层析；依次用体积比为95:5；90:10；85:15；80:20；70:30；60:40；50:50；40:60的乙酸乙酯/石油醚洗脱液进行洗脱，每个梯度洗脱100mL，流速控制为2mL/min，每10mL收集1管，60℃真空干燥，初步用TLC分析流出物，合并神经酰胺高浓度流分段，减压浓缩至干，获得神经酰胺粗品。

3.如权利要求1所述的一种从海洋球石藻中提取神经酰胺的方法,其特征在于：所述步骤三中，将上述神经酰胺粗品用适量甲醇溶解后，上葡聚糖凝胶柱Sephadex LH-20，用体积比为1:1的氯仿：甲醇进行洗脱，流速控制6-10秒/滴，使用自动收集器收集各馏分，每30min收集一管，初步用TLC分析流出物，合并132至146管的馏分，减压浓缩至干，获得神经酰胺一次精品。

4.如权利要求1所述的一种从海洋球石藻中提取神经酰胺的方法,其特征在于：所述步骤四中，将神经酰胺一次精品经过正相硅胶柱层析用硅胶粉拌样，硅胶用石油醚饱和后装柱，样品上柱后用石油醚和乙酸乙酯进行洗脱，流速控制6-10秒/滴，石油醚和乙酸乙酯的体积比为1:1，收集馏分，合并10-16管，减压浓缩至干，获得神经酰胺二次精品。

5.如权利要求1所述的一种从海洋球石藻中提取神经酰胺的方法,其特征在于：所述步骤五中，将神经酰胺二次精品经过PTLC，最终得到神经酰胺；采用高效薄层层析板，在体积比为19:0.9:0.1的氯仿/甲醇/醋酸展开剂中展开，采用显色剂喷雾显色，用刀片刮取中间部分，合并，用甲醇溶解，高速离心，收集上清液，减压浓缩至干，最终得到神经酰胺。

6.如权利要求5所述的一种从海洋球石藻中提取神经酰胺的方法,其特征在于：所述显色剂为质量体积分数g/mL为1％的茜素-乙醇溶液。