[发明专利]一种从海洋球石藻中提取神经酰胺的方法

说明书

本发明公开了一种从海洋球石藻（Emiliania huxleyi）中提取神经酰胺的方法，依次以：用石油醚进行萃取；用反相硅胶柱进行层析；用葡聚糖凝胶柱Sephadex LH‑20进行层析；用正相硅胶柱进行层析；用PTLC制备的方法从海洋球石藻中提取神经酰胺。本发明首次对海洋球石藻石油醚相提取物的神经酰胺进行了分离、纯化，该神经酰胺对肝癌细胞Hep G2的抑制率为62.64%，为后续大规模生产神经酰胺奠定基础。

技术领域

本发明涉及生物制剂的技术领域，尤其涉及一种从海洋球石藻中提取神经酰胺的方法。

背景技术

海洋球石藻(Coccolithophores)是一类单细胞海洋微型浮游植物，隶属于定鞭藻门(Haptophyta＝Prymnesiophyta)定鞭藻纲(Prymnesiophyceae)。海洋球石藻代谢产物中富含多种生物活性物质，如二十二碳六烯酸(DHA)、聚酮类化合物等，尤其是海洋微藻细胞中总脂含量最高可达细胞干重的50％，其中鞘脂类含量可达到细胞干重的0.914％，而其中99％为神经酰胺。神经酰胺具有良好的抑菌、抗炎、抗肿瘤等生物功能，在食品、化妆品及医药领域具有广阔的应用前景。但目前有关海洋球石藻神经酰胺类物质领域的研究较少。

有鉴于此，本发明人研究和设计了一种从海洋球石藻中提取神经酰胺的方法，本案由此产生。

发明内容

本发明的目的在于提供一种从海洋球石藻中提取神经酰胺的方法，旨在通过薄层层析法、硅胶柱层析法、凝胶柱层析法、制备型薄层PTLC等方法对海洋球石藻石油醚相提取物的神经酰胺进行分离、纯化，以便于后续大规模化生产神经酰胺。

为了解决上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种从海洋球石藻中提取神经酰胺的方法,依次以：用石油醚进行萃取；用反相硅胶柱进行层析；用葡聚糖凝胶柱Sephadex LH-20进行层析；用正相硅胶柱进行层析；用PTLC制备的方法从海洋球石藻中提取神经酰胺。

作为实施例的优选方式，上述提取神经酰胺的方法具体包括以下步骤：

步骤一、制备海洋球石藻石油醚相萃取物：以石油醚为萃取剂进行萃取处理，合并萃取液，减压浓缩得到海洋球石藻石油醚相萃取物；海洋球石藻生长至稳定期，收获，冷冻干燥获得海洋球石藻藻粉，用质量分数75％的乙醇浸提，获得乙醇浸膏，加入等体积的石油醚和水，反复萃取，收集石油醚相，合并、减压浓缩至干，获得海洋球石藻石油醚相萃取物；

步骤二、反相硅胶柱层析制备神经酰胺粗品：将获得的海洋球石藻石油醚相萃取物以反相硅胶柱进行层析处理，收集，检测、合并、减压浓缩至干，得到神经酰胺粗品；

作为实施例的优选方式，将海洋球石藻石油醚相萃取物用适量的分析纯甲醇溶解后，进行反相硅胶柱层析；依次用体积比为95:5；90:10；85:15；80:20；70:30；60:40；50:50；40:60的乙酸乙酯/石油醚洗脱液进行洗脱，每个梯度洗脱100mL，流速控制为2mL/min，每10mL收集1管，60℃真空干燥，初步用TLC分析流出物，合并神经酰胺高浓度流分段，减压浓缩至干，获得神经酰胺粗品；

步骤三、葡聚糖凝胶柱Sephadex LH-20层析制备神经酰胺一次精品：将获得的神经酰胺粗品以葡聚糖凝胶柱Sephadex LH-20进行层析处理，收集，检测、合并、减压浓缩至干，得到神经酰胺一次精品；

作为实施例的优选方式，将上述神经酰胺粗品用适量甲醇溶解后，上葡聚糖凝胶柱Sephadex LH-20，用体积比为1:1的氯仿：甲醇进行洗脱，流速控制6-10秒/滴，使用自动收集器收集各馏分，每30min收集一管，初步用TLC分析流出物，合并132至146管的馏分，减压浓缩至干，获得神经酰胺一次精品；