[发明专利]液相色谱串联质谱测定血清中维生素A和E的方法

权利要求书

1.一种液相色谱串联质谱测定血清中维生素A和E的方法，其特征在于，包括：

(1)通过样本制备液提取血清样本中的维生素A和维生素E，具体为：

取50μL血清样本或标准品至5mL玻璃管，加入20μL同位素内标，混合震荡，加入200μL甲醇溶液，加入100μL硫酸锌溶液，加入1mL正己烷，混合震荡，取上清液800μL，氮气吹干，加入300μL复溶液，等待上机测试，进样体积：10μL；

其中，所述甲醇溶液为含有30mg/L 2,6-二叔丁基对甲苯酚(BHT)的的甲醇溶液；

所述硫酸锌溶液的浓度为0.2M；

所述同位素内标包括：视黄醇-d6溶液：浓度为0.8μg/mL；α-生育酚-d6溶液：浓度为15μg/mL；

所述复溶液为由甲醇与水以8:1的体积比混合后的混合物；

将提取后的样本通过色谱仪取样进入色谱质谱系统，通过色谱柱的初步分离，进入质谱中，再根据质谱中产生不同的质荷比检测样本中是否含有维生素A和维生素E，实现血清中维生素A和E的定性检测；

所述色谱柱的初步分离中，所使用的仪器分析液中含有：流动相A：含有0.01％-0.1％甲酸的甲醇溶液；流动相B：含有0.01％-0.1％甲酸的水溶液；

液相色谱流动相A和流动相B按如下梯度进行设置：

(2)采用稳定同位素标记的视黄醇-d6和α-生育酚-d6作为内标，通过制备一系列不同浓度的标准品溶液，检测信号强度，以标准品溶液的浓度作为横坐标，以标准品溶液信号强度与内标信号强度的比值作为纵坐标，制作标准曲线；

(3)检测待测样本的信号强度，将其与内标信号强度的比值代入上述标准曲线进行计算，得到待测样本中检测目标的浓度，实现对血清中维生素A和E的定量检测；

其中，进入质谱后，选择多离子监测反应模式，正离子模式，电喷雾电离，离子源温度300-600℃，GS1：30-80，GS2：30-80，具体监测的离子对以及碰撞能量(CE)、去簇电压(DP)如下：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所使用的仪器分析液中含有：流动相A：含有0.02％甲酸的甲醇溶液；流动相B：含有0.02％甲酸的水溶液。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述标准品溶液的制备方法如下：

使用Cerilliant准确定值的标准溶液作为标准品溶液的母液，将维生素A的母液和维生素E的母液同时加入A级定容瓶准确定容作为储存液，此时，储存液中维生素A的浓度为6.22μg/mL，维生素E的浓度为47.1μg/mL；经一系列稀释使维生素A的浓度分别为6.22，3.11，1.56，0.78，0.39，0.19，0.10，0.05μg/mL；维生素E的浓度分别为47.1，23.6，11.78，5.89，2.94，1.47，0.74，0.37μg/mL。

4.一种用于液相色谱串联质谱测定血清中维生素A和E的试剂盒，其特征在于，包括样本制备液、标准品溶液、和仪器分析液：

其中，所述样本制备液包括甲醇溶液，正己烷，硫酸锌溶液，同位素内标，复溶液：所述甲醇溶液为含有30mg/L 2,6-二叔丁基对甲苯酚(BHT)的甲醇溶液；所述正己烷为色谱级别的正己烷；所述硫酸锌溶液的浓度为0.2M；所述同位素内标包括：视黄醇-d6溶液：浓度为0.8μg/mL；α-生育酚-d6溶液：浓度为15μg/mL；所述复溶液为由甲醇与水以8:1的体积比混合后的混合物；

其中，所述标准品溶液的制备方法如下：

使用Cerilliant准确定值的标准溶液作为标准品溶液的母液，将维生素A的母液和维生素E的母液同时加入A级定容瓶准确定容作为储存液，此时，储存液中维生素A的浓度为6.22μg/mL，维生素E的浓度为47.1μg/mL；经一系列稀释使维生素A的浓度分别为6.22，3.11，1.56，0.78，0.39，0.19，0.10，0.05μg/mL；维生素E的浓度分别为47.1，23.6，11.78，5.89，2.94，1.47，0.74，0.37μg/mL；

其中，所述仪器分析液包括：

流动相A：含有0.01％-0.1％甲酸的甲醇溶液；流动相B：含有0.01％-0.1％甲酸的水溶液。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述流动相A为使用0.02％甲酸的甲醇溶液；所述流动相B为使用0.02％甲酸的水溶液。