[发明专利]液相色谱串联质谱测定血清中维生素A和E的方法

说明书

本发明属于维生素检测技术领域，具体公开了一种液相色谱串联质谱测定血清中维生素A和E的方法。本发明对每种待测物均采用两种离子对进行监测，一种用于定量监测，一种用于定性监测，以增加检测特异性，避免复杂血液成分中的潜在干扰。不仅如此，本发明通过在溶液中加入一种抗氧化剂，使操作过程中不需避光即可完成，方便操作实行。

技术领域

本发明属于维生素检测技术领域，具体地说，涉及液相色谱串联质谱测定血清中维生素A和E的方法。

背景技术

维生素是维持生命活动必须的一类有机物质，通过调节机体代谢维持人体健康。大多数维生素，机体不能合成或合成量不足，不能满足机体的需要，必须通过食物获得，少数维生素可通过自身合成获得，但当机体处于疾病状态或者受到生活方式的影响亦可导致缺乏。维生素A和维生素E都属于脂溶性维生素，是人体必需的营养素。维生素A(vitaminA)又称视黄醇，是一个具有脂环的不饱和一元醇，具有维持视觉、维护上皮组织细胞、促进免疫球蛋白合成、维持骨骼生长发育、抑制肿瘤等重要生理功能。

维生素E(Vitamin E)是最主要的抗氧化剂之一，其水解产物为生育酚。维生素E溶于脂肪和乙醇等有机溶剂中，不溶于水，对热、酸稳定，对碱不稳定，对氧敏感，对热不敏感，但油炸时维生素E活性明显降低。维生素E苯环上的酚羟基被乙酰化，酯水解为酚羟基后为生育酚。生育酚能促进性激素分泌，使男子精子活力和数量增加；使女子雌性激素浓度增高，提高生育能力，预防流产，还可用于防治男性不育症、烧伤、冻伤、毛细血管出血、更年期综合症、美容等方面。近来还发现维生素E可抑制眼睛晶状体内的过氧化脂反应，使末梢血管扩张，改善血液循环，预防近视眼发生和发展。维生素E包括生育酚和三烯生育酚两类共8种化合物，即α、β、γ、δ-生育酚和α、β、γ、δ三烯生育酚，α-生育酚是自然界中分布最广泛含量最丰富活性最高的维生素E形式，其通过清除过氧化物来保护不饱和脂肪酸，并且在癌症、心血管疾病、白内障、老年性黄斑变性等疾病中起到重要的抗氧化剂作用。维生素E临床检测中主要为检测α-生育酚。

对于血清中维生素A和E的测定，已报道的测定方法多是基于液相色谱，关注焦点在于维生素A(视黄醇)和维生素E(α-生育酚)。也有关于γ-生育酚以及β-生育酚的液相色谱定量方法，但是目前认为临床最有意义的仍为视黄醇(维生素A)和α-生育酚(维生素E)。维生素A和E目前主要的技术及文献多是采用液相色谱进行分离测定(B.L.Lee,A.L.New,C.N.Ong,Clin.Chem.49 2003，2056–2066；)，也被报道可通过微乳球电泳色谱来分离(M.Bustamante-Rangel,M.M.Delagado-Zamarreno,A.Sanchez-Perez,R.Carabias-Martinez,J.Chromatogr.A 1125 2006，270–273.)。但是由于维生素E存在多种亚型，分离需要时间较长(B.L.Lee,A.L.New,C.N.Ong,Clin.Chem.492003，2056–2066.)，且色谱法检测主要是依赖于色谱柱对不同待测物的保留时间不同而进行分离，依靠不同的紫外吸收波长进行检测，不是对待测分子直接检测，特异性较低，临床样本成分复杂，可能存在与待测物色谱保留时间及紫外吸收均相同的物质，而对检测成分产生干扰。

液相色谱串联质谱技术是一门新兴的技术，其具有色谱的分离能力，以及质谱的特异性鉴定能力，在小分子物质测定中具有极大的优势，被认为是小分子检测的参考方法(如目前的维生素D，血糖，肌酐等小分子检测的参考方法)。

CN106442754A公开了一种同时检测血液中维生素A和维生素E含量的方法，包括以下步骤：(一)将全血样本离心，取上清液得血清或血浆，备用；(二)标准溶液的标定；(三)样品前处理；(四)取步骤(三)中上清液样品80μL放入自动进样瓶中经液相色谱法或液相色谱串联质谱进行分析，同时定量检测血液中维生素A(视黄醇)和维生素E(α-生育酚)的含量。