[发明专利]一种利用昆虫几丁质酶降解固体几丁质生产N-乙酰氨基葡萄糖的方法有效
| 申请号： | 201810044270.0 | 申请日： | 2018-01-17 |
| 公开（公告）号： | CN108085353B | 公开（公告）日： | 2021-03-16 |
| 发明（设计）人： | 杨青;屈明博;刘田;杨君;陈磊;刘元盛 | 申请（专利权）人： | 大连理工大学 |
| 主分类号： | C12P19/26 | 分类号： | C12P19/26;C12P19/14 |
| 代理公司： | 大连东方专利代理有限责任公司 21212 | 代理人： | 刘慧娟;李馨 |
| 地址： | 116024 辽*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 利用 昆虫 几丁质 降解 固体 生产 乙酰 氨基 葡萄糖 方法 | ||
1.一种利用昆虫几丁质酶降解固体几丁质生产N-乙酰氨基葡萄糖的方法，其特征在于：包括如下步骤：
（1）固体几丁质的前处理步骤：取固体几丁质溶于水中配制成0.5-2%溶液，在75-100MPa条件下，采用高压匀浆机进行破碎，得到300-700纳米长，30-80纳米宽的几丁质微丝；
（2）N-乙酰氨基葡萄糖的制备：以几丁质微丝为底物进行水解，所述水解使用的复合酶为：终浓度0.3mg/mL的几丁质酶H、终浓度0.06mg/mL的几丁质酶I和终浓度0.06mg/mL的β-N乙酰己糖胺酶1；其中，几丁质酶H：几丁质酶I：β-N乙酰己糖胺酶1的浓度比为5:1:1；所述几丁质酶H为昆虫来源的几丁质酶Chi-h，所述的几丁质酶I和β-N乙酰己糖胺酶1分别为昆虫来源的几丁质酶ChtI和Hex1；编码所述几丁质酶H的基因的GenBank ID为AB201281，编码所述几丁质酶I的基因的GenBank ID为DQ294305，编码所述β-N乙酰己糖胺酶1的基因的GenBank ID为DQ887769。
2.根据权利要求1所述的利用昆虫几丁质酶降解固体几丁质生产N-乙酰氨基葡萄糖的方法，其特征在于：所述步骤（2）中N-乙酰氨基葡萄糖的制备为：以几丁质微丝为底物，加入权利要求1中所述的复合酶；在25-32℃，pH5.5-6.5，震荡速度为180-220 rpm条件下反应至少5小时。
3.根据权利要求1所述的利用昆虫几丁质酶降解固体几丁质生产N-乙酰氨基葡萄糖的方法，其特征在于：所述昆虫几丁质酶H、几丁质酶I或β-N乙酰己糖胺酶1的获得，是利用毕赤酵母工程菌株，分别表达所述昆虫几丁质酶H、几丁质酶I或β-N乙酰己糖胺酶1，再从酵母发酵液上清中分离得到相应的重组蛋白。
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