[发明专利]一种用于治疗骨质疏松的多肽及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种用于治疗骨质疏松的多肽，其特征在于，其具有如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。

2.一种如权利要求1所述的多肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤(1)多肽的合成；

对树脂反应柱依次进行脱保护和脱保护洗涤；脱保护洗涤完成后，取适量的氨基酸混合溶液或保护氨基酸以及适量的缩合剂加入树脂反应器，再将适量的有机碱加入树脂反应器，进行反应；反应完成后对树脂反应器进行洗涤；重复脱保护、脱保护洗涤、反应和洗涤步骤，直到连完最后一个氨基酸；合成完毕后，对树脂反应柱进行洗涤，洗涤完成后将树脂从树脂反应柱中取出进行干燥，获得干燥树脂；

步骤(2)多肽的切割；

将步骤(1)中获得的干燥树脂移至容器中，在该容器中加入切割液，恒温振荡，进行反应产物的切割，获得切割产物；将切割产物进行过滤，滤除树脂，收集滤液，将无水乙醚加入滤液中，析出白色固体，获得初级多肽粗品；将初级多肽粗品进行离心，去除上清液，然后对白色固体进行重复洗涤和离心；将洗涤后获得的白色固体进行干燥，获得多肽粗品；

步骤(3)多肽粗品的分离纯化；

超声溶解步骤(2)获得的多肽粗品，溶解完全后用滤膜过滤，将过滤好的多肽粗品进行制备，并收集馏分、检验纯度，纯度合格的多肽粗品进行氧化；将氧化好的多肽粗品重新制备，并收集馏分、检验纯度，纯度合格的多肽粗品进行冷冻干燥，获得多肽精品。

3.根据权利要求2所述的多肽的制备方法，其特征在于，所述缩合剂选自HOBT、HBTU、TBTU中的一种；所述有机碱选自DIEA、NMM中的一种；所述树脂选自PAM、MBHA、Wang、2-Cl-Trt、Rink-Amide-MBHA中的一种。

4.根据权利要求3所述的多肽的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)多肽的合成包括如下具体步骤：

1a)脱保护：在树脂反应柱中加入适量脱保护溶液，通氮气，抽干；

1b)脱保护洗涤：向树脂反应柱中加入适量DMF，通氮气，抽干；

1c)投料、反应：取适量的氨基酸混合溶液或保护氨基酸以及适量的HBTU加入树脂反应器，再加入适量的NMM，通氮气，抽干；

1d)反应后洗涤：加入适量DMF，通氮气，抽干；

1e)反应产物的检测：取树脂反应器中的适量树脂进行检测，若反应没有完全，则重新再反应一次，若反应完全，则重复上述步骤1a)～1d)，直到连完最后一个氨基酸；

1f)合成完毕后，对树脂反应柱进行洗涤，洗涤完成后将树脂从树脂反应柱中取出进行干燥，获得干燥树脂。

5.根据权利要求4所述的多肽的制备方法，其特征在于，

所述脱保护溶液为20v％的六氢吡啶和80v％的DMF；

所述保护氨基酸包括Fmoc-Arg(Me.pbf)-OH、Fmoc-Asp(otbu)-oh、Fmoc-Ser(tbu)-oh、Fmoc-Asn(trt)-OH、Fmoc-Phe-oh、Fmoc-AzaGly-Leu-oh、Fmoc-D-Trp(boc)-oh、Fmoc-D-Tyr(tbu)-oh；

所述氨基酸混合溶液由各保护氨基酸溶于DMF溶液中配制而成，其浓度为0.3mmol/ml；

所述反应产物的检测步骤中使用的检测液包括A液：80v％的苯酚和20v％的无水乙醇；B液：重蒸吡啶；以及C液：5g茚三酮和100ML无水乙醇。

6.根据权利要求2所述的多肽的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中的切割液的组成及其重量配比为：87.5％TFA、5％苯甲硫醚、2.5％苯酚、2.5％EDT和2.5％H₂O。

7.根据权利要求2所述的多肽的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中多肽粗品的制备及重新制备的步骤均为：以制备条件平衡仪器约6分钟后停所有泵，将滤好的样品用进样阀进样，运行制备梯度，先跑5-5％的梯度20min，再执行80-80％的梯度，收集馏分；收集结束后，停泵；将收集的馏分在分析仪器上检验纯度。

8.一种如权利要求1所述的多肽在制备治疗骨质疏松的药物中的应用。