[发明专利]骨髓细胞基因组DNA的提取方法及提取试剂盒

权利要求书

1.一种骨髓细胞基因组DNA的提取方法，其特征在于：其包括以下步骤：

(1)、将骨髓细胞样品、蛋白酶K和裂解液混合，裂解后得到裂解悬浮液；

(2)、将所述裂解悬浮液冷却至室温，与核糖核酸酶混合并消化后，得到消化液；

(3)、将消化液与无水乙醇混合，待溶液澄清后作为上样液加入硅胶吸附柱中进行吸附，依次采用第一洗涤液和第二洗涤液清洗所述硅胶吸附柱并弃去废液；

(4)、采用洗脱液洗脱步骤(3)得到的硅胶吸附柱，分离得到骨髓细胞基因组DNA。

2.根据权利要求1所述的骨髓细胞基因组DNA的提取方法，其特征在于：所述骨髓细胞样品与所述蛋白酶K的体积比可以为(5‐20):1，可以为(8‐15):1，也可以为10:1；和/或，

所述骨髓细胞样品与所述裂解液的体积比可以为1:(0.5‐2)，可以为1:1。

3.根据权利要求1所述的骨髓细胞基因组DNA的提取方法，其特征在于：所述裂解液包括：盐酸胍、脱氧胆酸钠、离子型表面活性剂和非离子型表面活性剂。

4.根据权利要求3所述的骨髓细胞基因组DNA的提取方法，其特征在于：所述裂解液中的所述盐酸胍的可以为3‐10M，可以为3.5‐9.5M，还可以为5‐9M；进一步可以为5.5‐7.5M；和/或，

所述裂解液中脱氧胆酸钠的质量体积百分比可以为0.1‐0.5％，可以为0.2‐0.4％，更可以为0.25‐0.3％；和/或，

所述离子型表面活性剂为月桂酰基肌氨酸钠，在所述裂解液中的质量体积百分比为0.8％‐1.2％；和/或，

所述非离子型表面活性剂为聚氧乙烯醚，在所述裂解液中的质量体积百分比浓度为0.4％‐0.5％。

5.根据权利要求3所述的骨髓细胞基因组DNA的提取方法，其特征在于：所述第一洗涤液为盐酸胍和无水乙醇的混合液，pH值为9.0‐10.0；

可选地，所述第一洗涤液中盐酸胍的摩尔浓度大于所述裂解液中盐酸胍的摩尔浓度；和/或，所述第一洗涤液中盐酸胍与所述无水乙醇的体积比为1:(0.9‐1)；

可选地，所述第一洗涤液中盐酸胍的浓度是所述裂解液中盐酸胍的浓度1.4倍至2倍。

6.根据权利要求3所述的骨髓细胞基因组DNA的提取方法，其特征在于：所述第二洗涤液为Tris‐HCl缓冲液和无水乙醇的混合液，pH值为7.5‐8.5；

优选地，所述Tris‐HCl缓冲液中三羟甲基氨基甲烷(Tris)的浓度为100±10mM；和/或，所述Tris‐HCl缓冲液和无水乙醇的体积比为1:(3‐7)，也可以为1:(4‐5)。

7.根据权利要求1所述的骨髓细胞基因组DNA的提取方法，其特征在于：所述洗脱液为三羟甲基氨基甲烷(Tris)和乙二胺四乙酸(EDTA)的水溶液；

优选地，所述洗脱液中三羟甲基氨基甲烷(Tris)的浓度为10±1mM；和/或，所述洗脱液中EDTA的浓度为0.8‐1mM。

8.一种骨髓细胞基因组DNA提取试剂盒，其特征在于：其包括以下试剂：蛋白酶K试剂、裂解液、核糖核酸酶试剂、第一洗涤液、第二洗涤液、洗脱液和硅胶吸附柱。

9.根据权利要求8所述的骨髓细胞基因组DNA提取试剂盒，其特征在于：所述蛋白酶试剂含有20±10mg/mL的蛋白酶K；和/或，

所述裂解液包括盐酸胍、脱氧胆酸钠、离子型表面活性剂和非离子型表面活性剂；和/或，

所述第一洗涤液为盐酸胍和无水乙醇的混合液，pH值为9.0‐10.0；和/或，

所述第二洗涤液为Tris‐HCl缓冲液和无水乙醇的混合液，pH值为7.5‐8.5；和/或，

所述洗脱液为三羟甲基氨基甲烷(Tris)和乙二胺四乙酸(EDTA)的水溶液。

10.根据权利要求9所述的骨髓细胞基因组DNA提取试剂盒，其特征在于：所述裂解液中的所述盐酸胍的浓度为3‐10M，优选为3.5‐9.5M，更优选为5‐9M，进一步优选为5.5‐7.5M；和/或，

所述裂解液中脱氧胆酸钠的质量体积百分比为0.1‐0.5％，优选为0.2‐0.4％，更优选为0.25‐0.3％；和/或，

所述离子型表面活性剂为月桂酰基肌氨酸钠，其在所述裂解液中的质量体积百分比为0.8％‐1.2％；和/或，

所述非离子型表面活性剂为聚氧乙烯醚，其在所述裂解液中的质量体积百分比为0.4％‐0.5％；和/或，

所述第一洗涤液为盐酸胍和无水乙醇的混合液，所述第一洗涤液中盐酸胍的浓度大于所述裂解液中盐酸胍的浓度；和/或，

所述Tris‐HCl缓冲液中三羟甲基氨基甲烷(Tris)的浓度为100±10mM；和/或，

所述洗脱液中三羟甲基氨基甲烷(Tris)的浓度为10±1mM,；和/或，所述洗脱液中EDTA的浓度为0.8‐1mM。