[发明专利]骨髓细胞基因组DNA的提取方法及提取试剂盒

说明书

本发明提供了一种骨髓细胞基因组DNA的提取方法和提取试剂盒，提取方法包括：采用蛋白酶K和裂解液处理骨髓细胞样品，然后采用核糖核酸酶消化，与无水乙醇混合后放入硅胶吸附柱中吸附，依次采用第一洗涤液、第二洗涤液和洗脱液处理，得到纯化后的骨髓细胞基因组DNA。本发明的骨髓细胞基因组DNA的提取方法通过控制配方、调节pH值和离子浓度等，能够在低成本的情况下，提取出来质量高、纯度高的gDNA，提取效果稳定可靠。

技术领域

本发明属于DNA提取领域，涉及一种骨髓细胞基因组DNA的提取方法及提取试剂盒。

背景技术

骨髓细胞是人体内重要的细胞之一，了解骨髓细胞的基因组DNA(Genomic DNA，gDNA)有助于了解人体的健康情况，因此，就很有必要先提取骨髓细胞gDNA。

人们常用骨髓细胞gDNA提取试剂盒来提取骨髓细胞gDNA。目前市面上销售的骨髓细胞gDNA提取试剂盒要么为了提高gDNA的浓度而牺牲其纯度，要么为了提高其纯度而牺牲其浓度。gDNA的浓度和纯度均会对后继的建库和测序数据产生影响，因此，在提取gDNA时同时获得较高浓度和较大纯度的gDNA就非常有意义。

发明内容

本发明的目的在于为克服现有技术的缺陷而提供一种骨髓细胞基因组DNA的提取方法，其能够在低成本的情况下同时获得较高浓度和较大纯度的gDNA。

本发明的第二个目的在于提供一种能够实现上述方法的骨髓细胞基因组DNA提取试剂盒。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种骨髓细胞基因组DNA的提取方法，其包括以下步骤：

(1)、将骨髓细胞样品、蛋白酶K溶液和裂解液混合，裂解后得到裂解悬浮液；

(2)、将裂解悬浮液冷却至室温，与核糖核酸酶混合并消化后，得到消化液；

(3)、将消化液与无水乙醇混合，待溶液澄清后作为上样液加入硅胶吸附柱中进行吸附，依次采用第一洗涤液和第二洗涤液清洗硅胶吸附柱并弃去废液；

(4)、采用洗脱液洗脱步骤(3)得到的硅胶吸附柱，分离得到骨髓细胞基因组DNA。

其中，在上述的提取方法中，骨髓细胞样品与蛋白酶K溶液的体积比可以为(5‐20):1，可以为(8‐15):1，也可以为10:1。蛋白酶K溶液中蛋白酶K的浓度可以为20±10mg/ml，还可以为20±5mg/ml，也可以为20mg/ml。骨髓细胞样品与裂解液的体积比可以为1:(0.5‐2)，可以为1:1。

上述的裂解液的溶剂为双蒸水，溶质包括：盐酸胍、脱氧胆酸钠、离子型表面活性剂和非离子型表面活性剂。裂解液中的盐酸胍的浓度可以为3‐10M，可以为3.5‐9.5M，还可以为5‐9M，进一步可以为5.5‐7.5M。裂解液中脱氧胆酸钠的质量体积百分比可以为0.1‐0.5％，可以为0.2‐0.4％，更可以为0.25‐0.3％。离子型表面活性剂为月桂酰基肌氨酸钠，在裂解液中的质量体积百分比为0.8％‐1.2％。非离子型表面活性剂为聚氧乙烯醚，在裂解液中的质量体积百分比浓度为0.4％‐0.5％。

第一洗涤液为盐酸胍和无水乙醇的混合液，pH值为9.0‐10.0。可选地，第一洗涤液中盐酸胍的摩尔浓度大于裂解液中盐酸胍的摩尔浓度，可选地，第一洗涤液中盐酸胍的浓度是裂解液中盐酸胍的浓度1.4倍至2倍。第一洗涤液中盐酸胍与无水乙醇的体积比为1:(0.9‐1)。

第二洗涤液为Tris‐HCl缓冲液和无水乙醇的混合液，pH值为7.5‐8.5。Tris‐HCl缓冲液中三羟甲基氨基甲烷(Tris)的浓度可以为100±10mM。Tris‐HCl缓冲液和无水乙醇的体积比为1:(3‐7)，也可以为1:(4‐5)。