[发明专利]一种检测黄曲霉毒素B1的核酸适配体试纸条及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种检测黄曲霉毒素B1的核酸适配体试纸条的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

1）制备纳米金标记的黄曲霉毒素B1适配体溶液：取适配体干粉，开盖前先12r/min离心60s，离心后慢慢打开管盖，加入适量水，使适配体最终浓度为100μmol/L，振荡10min使其充分溶解；取2mL离心管，分别加入 25μL的100μmol/L的适配体，再向其中加入1μL的10μmol/L的TCEP溶液，于振荡器上反应振荡，室温反应1h后，使用截留分子量3000的超滤膜进行超滤，加入无酶水复溶至原体积；取上述2mL离心管，加入500μL浓度为1nmol/L的纳米金溶液，混匀；再加入2mol/L的柠檬酸三钠，使柠檬酸三钠最终浓度为500mmol/L，并调节溶液的pH为3；之后加入2μL的100μmol/L的适配体，使得纳米金和适配体的比例为1:100，并调节最终溶液的pH为7；离心20min，最终沉淀加重悬液复溶至原体积；其中，所述黄曲霉毒素B1适配体的核苷酸序列为5’-GTTGGGCACGTGTTGTCTCTCTGTGTCTCGTGCCCTTCGCTAGGCCCACAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA-3’，其3’端采用巯基修饰；所述重悬液为含质量百分数为0.25%牛血清白蛋白、2%蔗糖和0.5%吐温-20的10mmol/L PBS缓冲液；

2）制备具有包被生物素化探针1-链霉亲和素溶液的检测线和包被生物素化探针2-链霉亲和素溶液的质控线的硝酸纤维素膜；所述探针1的核苷酸序列为5’-GTGGGCCTAGCGAAGGGCACGAGACACAGAGAGACAACACGTGCCCAAC-3’，其3’端标记生物素；所述探针2的核苷酸序列为5’-TTTTTTTTTTTTTTTTTT-3’，其3’端标记生物素；所述链霉亲和素为巯基化链霉亲和素；

3）将样品垫置于含质量百分数为1%牛血清白蛋白、2%蔗糖和0.5%吐温-20的10mmol/LPBS缓冲液中浸泡2h，37℃烘2h备用；

4）将样品垫、硝酸纤维素膜、吸水垫顺次固定在支撑层上。

2.由权利要求1所述的制备方法制备的检测黄曲霉毒素B1的核酸适配体试纸条在检测黄曲霉毒素B1中的应用。