[发明专利]一种检测黄曲霉毒素B1的核酸适配体试纸条及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种检测黄曲霉毒素B1的核酸适配体试纸条及其制备方法和应用。本发明所提供的试纸条包括样品垫、硝酸纤维素膜、吸水垫、支撑层及配套试剂，所述配套试剂为纳米金标记的黄曲霉毒素B1适配体溶液，所述硝酸纤维素膜上有检测线和质控线，所述检测线包被生物素化探针1‑链霉亲和素溶液，所述质控线包被生物素化探针2‑链霉亲和素溶液。本发明的试纸条具有灵敏度高、特异性强、操作简单、经济实用等优点，适用于黄曲霉毒素B1残留的快速检测。

技术领域

本发明涉及黄曲霉毒素B1的检测，具体涉及一种检测黄曲霉毒素B1的核酸适配体试纸条及其制备方法和应用。

技术背景

粮食在储存、运输和加工过程中由于温度和湿度的影响，容易滋生黄曲霉，进而产生黄曲霉毒素(aflatoxin)。黄曲霉毒素(AFT)是一类真菌(如黄曲霉和寄生曲霉)的有毒代谢产物，目前已发现20余种，它们都有致癌作用，其中黄曲霉毒素B1(AFB1)的毒性、致癌性、污染频率均居于首位，主要作用靶器官是肝脏，有强烈的致癌作用，在1993年被世界卫生组织(WHO)国际癌症研究机构认定为一级致癌物。AFB1主要存在于谷物、坚果、花生、动物饲料等相关产品中，目前有报道水中也含有黄曲霉毒素。因此，对黄曲霉毒素B1进行快速灵敏检测是保证食品安全和人们身体健康的有效措施。

目前，黄曲霉毒素B1的检测方法主要包括酶联免疫吸附法(ELISA)、免疫亲和柱-荧光分光光度计法(SFB)、免疫亲和柱-高效液相色谱法(IAC-HPLC)以及高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)等。其中，HPLC法测定准确，分辨率高，可同时测定多种黄曲霉毒素成分，完成定性、定量测定而被广泛应用，但由于食品样品中含有大量化合物，需要对测量样品进行净化处理以及对毒素进行富集，操作步骤繁琐，耗时费力，并且仪器价格昂贵，需要专业人员操作，不适合于大批量样品的检测；ELISA检测方法具有特异性强、样品前处理简单、成本低、能进行批量检测等优点，但由于需要酶标仪和操作熟练的人员以及检测时间相对较长，所以不适合现场快速检测。因此急需开发新的快速简单灵敏的黄曲霉毒素B1检测方法。

纳米金标记免疫分析法是近年来迅速发展的一种新型分析技术，其特点是简便快速、成本低、无污染、无需培训，非常适合于现场检测。目前通常将抗体作为生物识别因子，利用抗原抗体的特异性识别进行检测，但是抗体成本较高，不方便保存，而且制备抗体时需要活体中产生免疫，批次稳定性较差。核酸适配体作为一种新型识别分子，是通过SELEX技术从10¹⁴-10¹⁸文库中筛选出来的，具有极高的亲和力和特异性，与抗体相比，具有易于合成制备、性能稳定、便于修饰等优点，已被用于多种物质的检测。因此，研制快速、灵敏、高效的黄曲霉毒素B1核酸适配体试纸条对于保障食品安全具有十分重要的意义。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种检测黄曲霉毒素B1的核酸适配体试纸条。

本发明所提供的检测黄曲霉毒素B1的核酸适配体试纸条，包括样品垫、硝酸纤维素膜、吸水垫、支撑层及配套试剂；

所述配套试剂为纳米金标记的黄曲霉毒素B1适配体溶液，所述黄曲霉毒素B1适配体的核苷酸序列为：5’-GTTGGGCACGTGTTGTCTCTCTGTGTCTCGTGCCCTTCGCTAGGCCCACAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA-3’，其3’端采用巯基修饰；

所述硝酸纤维素膜上有检测线和质控线，所述检测线包被生物素化探针1-链霉亲和素溶液，所述探针1的核苷酸序列为：5’-GTGGGCCTAGCGAAGGGCACGAGACACAGAGAGACAACACGTGCCCAAC-3’，其3’端标记生物素；所述质控线包被生物素化探针2-链霉亲和素溶液，所述探针2的核苷酸序列为：5’-TTTTTTTTTTTTTTTTTT-3’，其3’端标记生物素。

所述链霉亲和素为巯基化链霉亲和素。

所述样品垫、硝酸纤维素膜、吸水垫顺次固定在所述支撑层上。