[发明专利]芍药属油用植物油脂中酚类化合物的分析方法

权利要求书

1.一种芍药属油用植物油脂中酚类化合物的分析方法，其特征在于包括以下步骤：

1)收集芍药属及相关植物中酚类化合物的名称、CAS号、化学式及相对分子质量信息，构建数据库；所述数据库包括酚酸类化合物、黄酮类化合物、单萜苷类化合物、酚苷类化合物以及茋类化合物；

2)从待分析芍药属油用植物油脂中提取酚类化合物，溶解于甲醇水溶液中制得提取液；

3)通过超高效液相色谱-质谱联用仪于负离子模式下得到所述提取液的总离子流色谱图，通过定性软件结合所述数据库检索得到提取液中含有的与数据库中精确分子量一致的色谱峰，然后利用Q-TOF-MS质谱分析器于负离子模式下选择目标色谱峰进行二级质谱分析，根据碎片离子信息推断提取液所含的酚类化合物；其中色谱条件为：色谱柱ZORBAXEclipse Plus C18，柱温30℃，流动相A为0.1％甲酸水溶液，流动相B为0.1％甲酸乙腈，流速为0.4mL/min，梯度洗脱程序为：0-3min，流动相A 95％-90％；3-4min，流动相A 90％-80％；4-8min，流动相A 80％-45％；8-10min，流动相A 45％-10％；平衡时间3min，进样量2μL；质谱条件为：离子源为ESI，离子采集范围是100～1000m/z，毛细管电压4000V，碎片电压140V，干燥气为9L/min高纯N₂，鞘气流速10L/min，喷雾气电压30psig；

4)将定性得到的酚类化合物进行分类归属，将具有每一类化合物母环结构的标准品配制成不同浓度梯度的对照品溶液，于上述色谱-质谱条件下，对系列梯度浓度对照品进行测定，以各个峰的色谱峰面积对分析物浓度作线性回归得到标准曲线，利用标准曲线对分类后的每一类化合物分别定量。

2.根据权利要求1所述的芍药属油用植物油脂中酚类化合物的分析方法，其特征在于：步骤2)中，所述提取液的制备方法为：称取芍药属油用植物油脂油样于离心管中，加入正己烷，振荡溶解油样后，再加入60％体积分数的甲醇水溶液，混匀并充分振荡2～5min，然后在2000～4000rpm转速下离心10～20min，收集下层甲醇相澄清液，重复以上步骤提取三次，收集三次提取液于38℃下旋蒸浓缩至干，最后用50％体积分数的甲醇水溶液再次溶解，溶解液过0.22μm有机滤膜后，密封冷藏备用。

3.根据权利要求2所述的芍药属油用植物油脂中酚类化合物的分析方法，其特征在于：所述油样:正己烷:60％甲醇水溶液:50％甲醇水溶液的比例为1g:1.5～2.5mL:2～3mL:50～150μL。

4.根据权利要求1所述的芍药属油用植物油脂中酚类化合物的分析方法，其特征在于：步骤4)中，所述标准品包括苯甲酸、肉桂酸、对羟基苯乙酸、柚皮素、芍药苷、丹皮酚和氧化白藜芦醇。

5.根据权利要求1所述的芍药属油用植物油脂中酚类化合物的分析方法，其特征在于：步骤4)中，所述对照品溶液的制备方法为：将所述标准品分别溶解于甲醇中配制成单一标准品成分的储备溶液，于-20℃下密封保存，通过稀释所述储备溶液得到不同浓度梯度的对照品溶液；所述储备溶液中标准品和甲醇的比例为1mg:1mL。

6.根据权利要求1所述的芍药属油用植物油脂中酚类化合物的分析方法，其特征在于：所述酚酸类化合物包括苯甲酸、绿原酸、没食子酸、芥子酸、对羟基苯甲酸、咖啡酸、阿魏酸、肉桂酸、对羟基苯乙酸、邻苯二甲酸及香草酸。

7.根据权利要求1所述的芍药属油用植物油脂中酚类化合物的分析方法，其特征在于：所述黄酮类化合物包括柚皮素、圣草酚、牡荆素、荭草素和芦丁。

8.根据权利要求1所述的芍药属油用植物油脂中酚类化合物的分析方法，其特征在于：所述单萜苷类化合物包括芍药苷、芍药内酯苷、氧化芍药苷、牡丹皮苷D、牡丹皮苷E、苯甲酰芍药苷、苯甲酰氧化芍药苷、牡丹皮苷C、牡丹皮苷A、牡丹皮苷H、牡丹皮苷J、没食子酰芍药苷及没食子酰氧化芍药苷。