[发明专利]一种不受泛素化蛋白酶体降解的突变PCV2病毒及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种突变的PCV2病毒，其特征在于：该突变的PCV2病毒的衣壳蛋白在宿主体内的泛素化蛋白酶体途径的降解中保持完整性；

所述泛素化蛋白酶体途径的降解或泛素化由猪MKRN1蛋白介导；

所述PCV2病毒的突变位点位于野生型PCV2病毒的衣壳蛋白上与泛素分子结合的氨基酸位点的编码序列处；

所述氨基酸位点选自野生型PCV2病毒的衣壳蛋白自氨基端起第164、179及191位赖氨酸中的三个；

所述突变的PCV2病毒的DNA序列如SEQ.ID.NO.1所示。

2.一种突变的PCV2病毒的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

通过免疫共沉淀试验确定猪MKRN1蛋白与野生型PCV2病毒衣壳蛋白的相互作用区域，在该区域内确定与泛素分子结合的降解位点，然后根据降解位点，通过重叠PCR，以野生型PCV2病毒的DNA为模板，扩增得到降解位点突变的PCV2病毒序列，将该序列环化后转染细胞，培养一定时间后收集病毒，所述位点选自野生型PCV2病毒的衣壳蛋白自氨基端起第164、179及191位赖氨酸中的三个，所述突变的PCV2病毒的DNA序列如SEQ.ID.NO.1所示。

3.根据权利要求2所述一种突变的PCV2病毒的制备方法，其特征在于：所述野生型PCV2病毒选自PCV2病毒2b亚型。

4.根据权利要求2所述一种突变的PCV2病毒的制备方法，其特征在于：所述重叠PCR采用的扩增引物为：

病毒DNA片段1引物：

Overlap-F1：5'-GAACCGCGGGCTGGCTGAACT -3'；

Overlap-R1：5'-CTTCCAACCAAATAACGCCAGAAATCAGCTGTGGATGAGAATTCAAACCAGTGCCAA -3'；

病毒DNA片段2引物：

Overlap-F2：5'-ATTTCTGGCGTTATTTGGTTGGAAGTAATCAATGGTGGAATCAAGGACAGGGGCGGG -3'；

Overlap-R2：5'-GCACCGCGGAAATTTCTGACAAACGTTACA -3'；

病毒DNA全长引物：

Overlap-F1：5'-GAACCGCGGGCTGGCTGAACT -3'；

Overlap-R2：5'-GCACCGCGGAAATTTCTGACAAACGTTACA -3'。

5.一种如权利要求1所述的突变的PCV2病毒在制备PCV2病毒感染动物细胞模型中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述动物细胞模型为感染突变的PCV2病毒的PK-15细胞。