[发明专利]螨变应原特异性卵黄免疫球蛋白抗体及其抗过敏制剂

权利要求书

1.一种螨变应原特异性IgY抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

螨变应原制备：选取纯化螨虫体，采用Coca’s液提取方法，制得螨变应原粗提物；

免疫疫苗制备：将所述螨变应原粗提物溶解在0.1mol/L 的PBS 溶液中充分混匀，得到螨变应原溶液, 其蛋白浓度为2mg/ml；吸取1-1.5ml螨变应原溶液，加入5.25-6ml生理盐水混匀，得到螨混合抗原溶液Ⅰ，按1:1 的比例将弗氏完全佐剂加入螨混合抗原溶液Ⅰ中混合均匀，制得乳状螨复合抗原免疫佐剂Ⅰ，作为首免疫苗；吸取2-3ml螨变应原溶液，加入5.25-6ml生理盐水混匀，得到螨混合抗原溶液Ⅱ，按1:1 的比例将弗氏不完全佐剂加入螨混合抗原溶液Ⅱ中混合均匀，制得乳状螨复合抗原免疫佐剂Ⅱ，作为强化免疫疫苗；

对鸡进行强化免疫：吸取所述首免疫苗剂量200μl，分别在鸡的左右翅下各两处进行皮下注入进行首次免疫，然后每隔10天使用所述强化免疫疫苗强化免疫一次，共强化免疫四次；在第三次和第四次强化免疫后分别收集经过强化免疫的鸡所产的鸡蛋，并在鸡翅下采血，采血量为1-1.5ml，首次免疫和第一次强化免疫在产蛋前期进行；

IgY抗体的提取：对收集的鸡蛋进行取蛋黄处理，1体积蛋黄加5-6体积的双蒸水，充分搅拌混合均匀后，调试pH至5-6，然后将其置于4℃静置8-10小时，冷冻离心15-30min，取上清液，获得粗提物；

精提：在获得的粗提物中加入60%硫酸钠沉淀一次，再用14%硫酸钠溶液沉淀两次，取上清液进行超滤除菌、除离子获得精提物；

纯化：通过纤维素对获得的精提物进行柱层析纯化，得到螨变应原特异性IgY抗体。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述螨变应原粗提物包括：屋尘螨蛋白Der p1和Der p2、粉尘螨蛋白Der f1和Der f2。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述纯化螨虫体通过如下方法获取：将螨虫接种至面粉培养基，将所述面粉培养基置入温度为25℃、相对湿度75%的恒温箱中培养4-6周，形成螨虫群落，将所述螨虫群落连同部分面粉培养基移入装有新鲜饲料的容器中继续培养4-6周，重复上述操作获得大量纯螨，将获得的大量纯螨移入整体螨培养基进一步繁殖，获得纯化螨虫体。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述进行强化免疫的鸡为梅林鸡、海兰褐鸡和京红鸡中的一种。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述进行强化免疫的鸡的鸡龄为120-150天，每只鸡为1.2-1.5kg。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在第三次和第四次强化免疫后分别收集经过强化免疫的鸡所产的鸡蛋，并对经过强化免疫的鸡每6只抽取1只，在鸡翅下采血，采血量为1-1.5ml。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述冷冻离心的速度为12000r/min。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述螨变应原特异性IgY抗体在制备治疗由螨变应原引起的过敏性鼻炎和过敏性鼻炎伴哮喘的药物中的用途。

9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述螨变应原特异性IgY抗体在制备治疗由螨变应原引起的过敏性皮炎的药物中的用途，所述过敏性皮炎包括痤疮。

10.根据权利要求1所述的螨变应原特异性IgY抗体制成的抗过敏制剂，其特征在于，按照重量百分含量计包括如下组分：

螨变应原特异性IgY抗体或其粗提物 0.15-2%；

羟乙基纤维素 0.5-1%；

木糖醇 0.5-1.0%；

丙三醇 1.0-2.0%；

聚山梨酯80 0.3-0.5%；

清凉醇 0.1-0.3%；

氯已定 0.01-0.02%；

双蒸水 加至100%。