[发明专利]特异性双酚A羊多克隆抗体及其应用

权利要求书

1.一种特异性双酚A羊多克隆抗体，其特征在于，该抗体主要通过如下步骤获得：

(1)将双酚A通过琥珀酸酐和载体蛋白进行偶联，制备免疫原；

(2)将上述免疫原免疫波尔山羊，制备羊抗血清；

(3)从羊抗血清中纯化分离制备特异性双酚A羊多克隆抗体。

2.根据权利要求1所述的特异性双酚A羊多克隆抗体，其特征在于：步骤(1)中所述的载体蛋白包括牛血清白蛋白、卵清蛋白、钥孔血蓝蛋白、人血清蛋白、多聚赖氨酸中的一种或几种。

3.根据权利要求1所述的特异性双酚A羊多克隆抗体，其特征在于：步骤(2)制备羊抗血清：

(2.1)用0.1mg～10mg的步骤(1)获得的双酚A免疫原，加入弗氏完全佐剂，采用皮下、皮内多点注射的方法免疫波尔山羊；

(2.2)每隔7～14天，加强免疫一次，加强免疫用弗氏不完全佐剂，采用皮下、皮内多点注射方式免疫；

(2.3)三免结束后，采血进行抗体滴度测定，当抗体滴度达到1比32以上时，终止免疫；

(2.4)终止免疫后，采集波尔山羊血液，待自然凝固后，离心上清即获得双酚A抗血清。

4.根据权利要求1所述的特异性双酚A羊多克隆抗体，其特征在于：步骤(3)中所述的分离制备得到特异性双酚A羊多克隆抗体：

(3.1)向步骤(2)方法获得的抗血清中加入20％～50％的硫酸铵进行沉淀，离心取沉淀，将沉淀复溶于20mM～100mM、pH7.2～8.0的PBS中；

(3.2)将步骤(1)复溶了沉淀的PBS上样于双酚A亲和填料中，再用20mM～100mM、pH7.2～8.0的PBS缓冲液洗涤柱子；

(3.3)用10mM～1M、pH2.5～4.0的柠檬酸缓冲液，洗涤亲和填料，直至有洗脱峰出现；

(3.4)收集洗脱峰液体，同时加入pH8.0、1M的Tris-HCl做中和缓冲液，直至pH为6.5～7.5之间；

(3.5)然后将收集的洗脱液透析于20mM～500mM、pH7.4的PBS缓冲液中，即制备特异性双酚A羊多克隆抗体。

5.根据权利要求4所述的特异性双酚A羊多克隆抗体，其特征在于：步骤(3.2)中的双酚A亲和填料为已用10倍填料体积的、20mM～100mM、pH7.2～8.0的PBS缓冲液洗涤过。

6.根据权利要求4所述的特异性双酚A羊多克隆抗体，其特征在于：步骤(3.2)中洗涤柱子用的缓冲液为双酚A亲和填料体积的5倍。

7.一种特异性双酚A羊多克隆抗体在间接竞争ELISA方法测定双酚A中的应用。