[发明专利]一种提取发酵液中鼠李糖脂产物的方法

说明书

本发明公开了一种提取发酵液中鼠李糖脂产物的方法，包括以下步骤：1)预处理：加热发酵液、冷却后离心除去菌体、变性蛋白等不溶物；2)絮凝与浓缩：上清液中加入适量壳聚糖、混匀，在适宜温度下自然沉降，弃掉上层液相；3)洗脱：蒸馏水清洗去除沉淀物中的残余发酵液后，加入适宜浓度的NaHCO₃溶液，洗脱沉淀物中的鼠李糖脂，收集洗脱液；4)获取：调节洗脱液pH、静置沉淀、离心，获得鼠李糖脂产物。本发明方法是一种简便、高效提取发酵液中鼠李糖脂的方法，在鼠李糖脂发酵生产领域具有重要应用价值。

技术领域

本发明属于鼠李糖脂发酵生产领域，具体地说，它涉及一种提取发酵液中鼠李糖脂产物的方法。

背景技术

鼠李糖脂是由铜绿假单胞菌等细菌代谢合成的一种生物表面活性剂，因其具有表面活性高、临界胶束浓度低，安全无毒、可生物降解等优势，因而在微生物采油、环境污染修复、食品、生物医药等技术领域具有广泛的应用前景。

鼠李糖脂产生菌的发酵液成分复杂，从发酵液中提取鼠李糖脂的成本高、难度较大。目前，从发酵液中提取鼠李糖脂的方法主要为氯仿-甲醇萃取法、硅胶柱层析法等，在萃取法和柱层析法中需要用到大量的氯仿，而氯仿是一种高毒性的有机氯化物，危害人体和环境。上述提取方法的高成本和高毒性限制了鼠李糖脂的发酵生产和应用。因此，获得一种简便、绿色的鼠李糖脂产物提取方法，将能够解决上述瓶颈问题。

本发明的鼠李糖脂提取方法不需要使用氯仿和甲醇等有毒溶剂，为绿色提取工艺。因此，该提取发酵液中鼠李糖脂的方法，在鼠李糖脂的发酵生产领域将具有重要的应用价值。

发明内容：

为了克服上述现有技术的不足，本发明提供了一种简便、高效提取发酵液中鼠李糖脂的方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种提取发酵液中鼠李糖脂产物的方法，包括以下步骤：1)预处理：加热发酵液、冷却后离心除去菌体、变性蛋白等不溶物；2)絮凝与浓缩：上清液中加入适量壳聚糖，搅拌混匀，在适宜温度下自然沉降，弃掉上层液相；3)洗脱：蒸馏水清洗去除沉淀物中残余发酵液后，加入适宜浓度的NaHCO₃溶液，洗脱沉淀物中的鼠李糖脂，收集洗脱液；4)获取：调节洗脱液pH、静置沉淀、离心，获得鼠李糖脂产物。

将产鼠李糖脂菌种的种子液接种至含发酵培养基的培养体系中(如三角瓶、发酵罐等)中，在30～40℃、160～220rpm条件下，培养2～6天，得到的含鼠李糖脂的发酵液。种子液与发酵培养基的体积比为2-6:100。

发酵培养基按质量分数为：碳源2～5％，NaNO₃ 0.2～0.4％，KH₂PO₄0.1～0.3％，K₂HPO₄·3H₂O 0.1～0.3％，MgSO₄·7H₂O 0.02～0.06％，酵母粉0.05～0.15％，余量为水；pH6.5～7.0。

发酵培养基的碳源，可以为葡萄糖、蔗糖、甘油、糖蜜、大豆油。

利用本发明方法提取发酵液中的鼠李糖脂产物，先对发酵液进行预处理，将发酵液放置在80～100℃水浴中加热处理20～60min；在8,000g～10,000g条件下，离心除去菌体和变性蛋白等不溶物。

按照壳聚糖终浓度为5～20g/L，向预处理后发酵液中加入脱乙酰度≥90％的壳聚糖，搅拌混匀，然后在30～40℃下，絮凝沉降1～2h，然后弃掉上层液相。

用20-50ml蒸馏水洗涤沉淀物3次，弃掉液相；加入20～50ml浓度为1～5g/L的NaHCO₃水溶液重悬沉淀物，洗脱3次，收集洗脱液。