[发明专利]一种重组人源胶原蛋白的纯化方法

权利要求书

1.一种重组人源胶原蛋白的纯化方法，其特征在于：

（1）粗分离

将重组人源胶原蛋白发酵液用沉降式离心机进行固液分离，所得上清液用0.2µm中空纤维膜进行过滤，滤出液用截留分子量为6K的超滤膜进行超滤；

（2）精细分离纯化

向步骤（1）超滤后的浓缩液中加入柠檬酸，调节浓缩液的电导率为2.1～5.8mS/cm，再用NaOH调节pH至4.5～6.0，然后通过弱阳离子交换层析柱纯化，纯化时先用流动相A洗脱，再用流动相A与流动相B体积比为95:5的混合液洗脱，最后用流动相A与流动相B体积比为90:10～70:30的混合液洗脱，洗脱流速均为150～250L/min；收集流动相A与流动相B体积比为90:10～70:30时的洗脱液，得到纯度大于98%的重组人源胶原蛋白；

上述的流动相A是20～50mmol/L pH=4.5～6.0的柠檬酸缓冲液；流动相B是含1mol/LNaCl的20～50mmol/L pH=4.5～6.0的柠檬酸缓冲液；

所述的重组人源胶原蛋白的氨基酸数量为411个，分子量为37.2KDa，PI为8.9～9.2，氨基酸序列如下所示：

GPPGEPGNPGKPGSPGPAGSNGEPGPAGSPGEKGSQGSNGNPGPAGNQGQPGNKGSPGNPGKPGEPGSNGPQGEPGSQGNPGKNGQPGSPGSQGSPGNQGQPGKPGQPGEQGSPGNQGPAGNEGPKGQPGQNGKPGSPGPPGEPGNPGKPGSPGPAGSNGEPGPAGSPGEKGSQGSNGNPGPAGNQGQPGNKGSPGNPGKPGEPGSNGPQGEPGSQGNPGKNGQPGSPGSQGSPGNQGQPGKPGQPGEQGSPGNQGPAGNEGPKGQPGQNGKPGTPGPPGEPGNPGKPGSPGPAGSNGEPGPAGSPGEKGSQGSNGNPGPAGNQGQPGNKGSPGNPGKPGEPGSNGPQGEPGSQGNPGKNGQPGSPGSQGSPGNQGQPGKPGQPGEQGSPGNQGPAGNEGPKGQPGQNGKP。

2.根据权利要求1所述的重组人源胶原蛋白的纯化方法，其特征在于：在步骤（1）中，所得上清液用0.2µm中空纤维膜进行过滤过程中，压力不得高于0.15MPa。

3.根据权利要求1所述的重组人源胶原蛋白的纯化方法，其特征在于：在步骤（1）中，所述截留分子量为6K的超滤膜为中空纤维超滤膜，且超滤过程中控制超滤膜压力不高于0.05MPa。

4.根据权利要求1所述的重组人源胶原蛋白的纯化方法，其特征在于：在步骤（2）中，所述弱阳离子交换层析柱的填料为高流速琼脂糖弱阳离子交换填料，填料总离子交换量不低于0.06mmol/mL，线性流速不得高于10mL/cm。

5.根据权利要求4所述的重组人源胶原蛋白的纯化方法，其特征在于：所述高流速琼脂糖弱阳离子交换填料的粒径为45～150μm。