[发明专利]源于一种深渊新物种的线粒体基因组序列

权利要求书

1.源于一种深渊新物种的线粒体基因组序列，其特征在于，所述基因组序列如SEQ IDNO:1所示，所述深渊新物种为小型端足类。

2.根据权利要求1所述的源于一种深渊新物种的线粒体基因组序列，其特征在于，所述线粒体基因组序列通过以下方法获得：

(1)小型端足类基因组DNA的提取；

(2)获取线粒体基因组DNA中12S rDNA，16S rDNA及COI基因的部分序列：

三个基因各对应一对节肢动物线粒体DNA的通用引物，名称分别为12SF，12SR；16SF，16SR；COIF，COIR；所述12SF的序列如SEQ ID NO:2所示，所述12SR的序列如SEQ ID NO:3，所述16SF的序列如SEQ ID NO:4所示，所述16SR的序列如SEQ ID NO:5所示，所述COIF的序列如SEQ ID NO:6所示，所述COIR的序列如SEQ ID NO:7所示；

以小型端足类DNA作为模板，进行PCR反应，对扩增产物进行测序，得到12S rDNA，16SrDNA及COI基三个基因的部分序列；

(3)利用步骤(2)得到的序列，进行长片段PCR反应引物的设计，获得COI至12S rDNA的间隔序列与COI至16S rDNA的间隔序列，引物名称分别为：LCOIF，L12SR及L16SF，LCOIR；以小型端足类DNA作为模板，进行LA-PCR反应，对扩增产物进行测序，实现间隔序列的获得；所述LCOIF的序列如SEQ ID NO:8所示，所述L12SR的序列如SEQ ID NO:9所示，所述L16SF的序列如SEQ ID NO:10所示，所述LCOIR的序列如SEQ ID NO:11所示；

(4)对步骤(2)和(3)得到的序列进行拼接。

3.根据权利要求2所述的源于一种深渊新物种的线粒体基因组序列，其特征在于，所述步骤(1)为：

1)取3-10mg小型端足类组织冷冻样品，放入到加有WTL buffer的离心管中，将组织剪碎；

2)向离心管中加入蛋白酶K，涡旋震荡15-20s，60-65℃放置6小时以上，离心以除去挂在管壁的水珠；

3)离心管冷却至室温，加入PCP buffer，涡旋震荡25-30s，冰浴5-10min；

4)以13000-15000g的转速离心3-5min，将上清液转移到另外一个离心管中；

5)向离心管中加入300-350μl异丙醇溶液，将溶液混合，冰浴1-2h；

6)以13000-15000g的转速离心3-5min，倒掉上清液；

7)加入700-750μl乙醇溶液，13000-15000g的转速离心3-5min，倒掉上清液；

8)重复步骤7)；

9)于无菌环境中将离心管中残余酒精风干10-15min；

10)加入50-100μl无菌水将DNA充分溶解后保存。

4.根据权利要求2所述的源于一种深渊新物种的线粒体基因组序列，其特征在于，所述步骤(1)为：

1)取3mg小型端足类组织冷冻样品，放入到加有300μl WTL buffer的离心管中，将组织剪碎；

2)向离心管中加入5μl20mg/ml的蛋白酶K，涡旋震荡15s，60℃放置6小时以上，离心以除去挂在管壁的水珠；

3)离心管冷却至室温，加入100μl的PCP buffer，涡旋震荡30s，冰浴5min；

4)以13000g的转速离心3min，将上清液转移到另外一个离心管中；

5)向离心管中加入300μl异丙醇溶液，将溶液混合，冰浴1h；

6)以13000g的转速离心5min，倒掉上清液；

7)加入700μl70％乙醇溶液，颠倒离心管使溶液混匀，13000g的转速离心5min，倒掉上清液；

8)重复步骤7)；

9)于无菌环境中将离心管中残余酒精风干10min；

10)加入50μl无菌水将DNA充分溶解后于-20℃冰箱中保存。