[发明专利]一种细胞接种及挑选细胞单克隆的方法、应用

权利要求书

1.一种细胞接种及挑选细胞单克隆的方法，其特征在于，包括细胞接种和挑选细胞单克隆，其中细胞接种包括以下步骤：

步骤(1)，选取对数生长期的细胞，消化细胞，计数并稀释，得到细胞悬液；

步骤(2)，在孔板中均加入培养基，晃动孔板至培养基浸润整个孔底，然后移除培养基，水平放置孔板；

步骤(3)，混匀步骤(1)中的细胞悬液，在步骤(2)孔板的孔内加入细胞悬液，静置20-30min；

步骤(4)，孔板经步骤(3)的静置后保持水平状态并移入二氧化碳培养箱培养，培养后细胞即能够均匀分布于孔板内；

步骤(5)，将步骤(4)中孔板孔内的细胞进行细胞转染，培养，直到有细胞单克隆的出现，用于挑选细胞单克隆；

所述挑选细胞单克隆包括以下步骤：

步骤A，选择步骤(5)中符合要求的细胞单克隆，进行标记；

步骤B，移除步骤(5)中培养板内的培养液，用PBS缓冲液冲洗培养板，并移除悬浮起来的细胞；

步骤C，将牛津杯底部粘附上封闭液；然后将牛津杯放在选定的细胞单克隆之上，垂直放下，圈住细胞单克隆；

步骤D，加0.25g/100ml胰酶到牛津杯里；室温下孵育1-5min；加培养基至到牛津杯中使细胞悬浮，然后将悬浮的细胞转移，完成细胞单克隆的挑选。

2.根据权利要求1所述的细胞接种及挑选细胞单克隆的方法，其特征在于，步骤(1)中采用0.25g/100ml胰酶消化细胞。

3.根据权利要求1所述的细胞接种及挑选细胞单克隆的方法，其特征在于，步骤(2)中所述孔板为6孔板、12孔板或24孔板。

4.根据权利要求1所述的细胞接种及挑选细胞单克隆的方法，其特征在于，步骤B中PBS缓冲液的pH为7.4-8.0，浓度为0.1-1mol/L。

5.根据权利要求1所述的细胞接种及挑选细胞单克隆的方法，其特征在于，步骤C中所述封闭液为融化的无菌硅脂、无菌甘油或者无菌石蜡油。

6.根据权利要求1所述的细胞接种及挑选细胞单克隆的方法，其特征在于，步骤D中采用的培养基中含有体积分数10％的胎牛血清。

7.根据权利要求1所述的细胞接种及挑选细胞单克隆的方法在细胞传代中的应用。