[发明专利]一种牛奶中A2-β-酪蛋白的检测方法

权利要求书

1.一种牛奶中A2-β-酪蛋白的检测方法，其特征在于，包括：

对A1型牛奶和A2型牛奶进行高效液相测试，将所得高效液相色谱图分别与αs-酪蛋白、β-酪蛋白和κ-酪蛋白标准品的高效液相谱图做对比，识别A1-β-酪蛋白和A2-β-酪蛋白的特征峰和出峰时间；结合待测牛奶的高效液相谱图定性检测其中β-酪蛋白的类型；

分离出A2型牛奶中的A2-β-酪蛋白并进行高效液相检测，获得A2-β-酪蛋白在高效液相中峰面积与浓度的对应关系，结合待测牛奶的高效液相谱图定量检测其中A2-β-酪蛋白的含量；

所述分离出A2型牛奶中的A2-β-酪蛋白的步骤如下：

1)将A2型牛奶脱脂，边搅拌边用盐酸调节pH值到4-5，并将该脱脂奶置于50℃水浴锅中保温10min，然后常温离心分层，保留沉淀；用pH值为4-5的酸溶液冲洗离心管两次，弃去上清液，保留沉淀；

2)向沉淀中加入pH值为4-5的酸溶液，并不断搅拌至呈乳浊液；将该乳浊液降温至2-4℃并继续搅拌12-16h，离心分层，留取上清液；

3)将上清液用200目滤布过滤，收集滤液；将该滤液水浴升温至30℃，涡旋混匀后冷冻干燥，即得到目标蛋白，在-20℃冷冻保存目标蛋白；

其中，所述A1型牛奶、A2型牛奶、αs-酪蛋白、β-酪蛋白、κ-酪蛋白、A2-β-酪蛋白以及待测牛奶在相同的条件下进行高效液相色谱测试，色谱条件如下：

色谱柱Vydac Everest C18 Column，250×4.6mm，5μm,

进样量50μL；

柱温40℃；

检测波长241nm，辅助280nm；

洗脱时间65min，流速1mL/min；

流动相包括流动相A和流动相B，其中，流动相A是质量分数为0.1％的三氟乙酸水溶液，流动相B是质量分数为0.1％的三氟乙酸乙腈溶液；洗脱程序：

时间/min	流动相A/％	流动相B/％	-1]]>
0	75.7	24.3	1
2	71.2	28.8	1
17	64.8	35.2	1
30	61.8	38.2	1
45	55.0	45.0	1
48	46.0	54.0	1
53	46.0	54.0	1
55	75.7	24.3	1
65	75.7	24.3	1

。