[发明专利]一种牛奶中A2-β-酪蛋白的检测方法

说明书

本发明公开了一种牛乳中A2‑β‑酪蛋白的检测方法，首先分别检测了已经通过基因型鉴定为A1型和A2型的牛奶的高效液相色谱图，并与αs‑酪蛋白、β‑酪蛋白和κ‑酪蛋白标准品的高效液相色谱图进行比对，确定出了A1‑β‑酪蛋白和A2‑β‑酪蛋白的色谱峰型及出峰时间，进而能够定性检测出未知牛奶中β‑酪蛋白是否为A2‑β‑酪蛋白；然后成功地从A2型牛奶中分离出了A2‑β‑酪蛋白，并测得A2‑β‑酪蛋白在高效液相中峰面积与浓度的对应关系，进而能够定量检测出未知牛奶中A2‑β‑酪蛋白的含量；本发明所涉及的检测方法简单、便捷，适宜于大规模推广应用。

技术领域

本发明涉及生物检测领域，具体涉及一种牛奶中A2-β-酪蛋白的检测方法。

背景技术

酪蛋白是牛乳中含量最高的蛋白质，占牛乳蛋白含量的80％左右。根据氨基酸组成和电泳行为的不同，酪蛋白可分为αs-酪蛋白、β-酪蛋白和κ-酪蛋白，其中β-酪蛋白约占牛乳酪蛋白总量的30-35％。β-酪蛋白又存在多种变体，最常见的是A1-β-酪蛋白和A2-β-酪蛋白，两者的区别在于氨基酸链的第67位存在变异，前者为组氨酸，后者为脯氨酸。研究发现，A1-β-酪蛋白在生物体内会水解产生β-酪啡肽(BCM-7)，该活性肽能够导致缺血性心脏病、动脉粥样硬化、I型糖尿病、新生儿猝死症及一些精神方面的疾病，因此含有A2-β-酪蛋白的乳制品更加健康安全，在国内外市场上也更受欢迎。

由于奶牛的基因决定了所产牛乳中β-酪蛋白是A1型或者A2型，所以目前主要通过牛只基因鉴定法来判断牛乳中β-酪蛋白的种类，该法不能判断未知奶牛基因型的牛乳样品，尤其是市售牛乳产品中β-酪蛋白的种类。现有的酪蛋白分析检测方法，利用高效液相色谱仪、凝胶电泳仪或者毛细管电泳仪等，仅能检测出αs-酪蛋白、β-酪蛋白和κ-酪蛋白，无法判断出β-酪蛋白的A1或A2型，而且在前处理中分离纯化酪蛋白的步骤繁琐、耗时长、花费高昂。因此，迫切需要一种对未知奶样中β-酪蛋白的高效、便捷提纯分离方法，以及利用常规检测仪器就能准确、快速检定出其中β-酪蛋白种类的方法。

发明内容

针对现有技术中存在的不足之处，本发明的目的就是提供便捷廉价的A2-β-酪蛋白的检测检定方法。

本发明提供了一种牛奶中A2-β-酪蛋白的检测方法，包括：

对A1型牛奶和A2型牛奶进行高效液相测试，其中A1型牛奶和A2型牛奶是经过多次常规基因检测法所确定，众所周知，A1型牛奶中的β-酪蛋白只有A1-β-酪蛋白，A2型牛奶中的β-酪蛋白只有A2-β-酪蛋白，这是由奶牛的基因型所决定，将所得高效液相色谱图分别与αs-酪蛋白、β-酪蛋白和κ-酪蛋白标准品的高效液相谱图做对比，识别A1-β-酪蛋白和A2-β-酪蛋白的特征峰和出峰时间，其中β-酪蛋白标准品并不能确定为A1型或者A2型，目前也没有市售的A2-β-酪蛋白；结合待测牛奶的高效液相谱图定性检测其中β-酪蛋白的类型，即通过其中β-酪蛋白的峰形、出峰时间等判断其为A1-β-酪蛋白或者A2-β-酪蛋白或者两者的混合物。

优选的是，所述检测方法还包括：

分离出A2型牛奶中的A2-β-酪蛋白并进行高效液相检测，获得A2-β-酪蛋白在高效液相中峰面积与浓度的对应关系，结合待测牛奶的高效液相谱图定量检测其中A2-β-酪蛋白的含量。

优选的是，所述A1型牛奶、A2型牛奶、αs-酪蛋白、β-酪蛋白、κ-酪蛋白、A2-β-酪蛋白以及待测牛奶在相同的条件下进行高效液相色谱测试，色谱条件如下：

色谱柱Vydac Everest C18 Column，250×4.6mm，5μm,

进样量50μL；

柱温40℃；

检测波长241nm，辅助280nm；

洗脱时间65min，流速1mL/min；