[发明专利]检测人血液ZnT8A的量子点荧光层析免疫分析试剂

权利要求书

1.一种检测人血液ZnT8A的量子点荧光层析免疫分析试剂，包括底板(1)，在底板的上面设置有样品垫(2)，量子点标记物结合垫(3)，层析反应膜(4)和吸水垫(5)，其特征是：

所述样品垫用下述方法制成：用0.01M，pH＝7.2的Tris-HCl作溶剂，将抗红细胞抗体配成0.1-0.2mg/ml溶液，用喷膜仪按20-50ul/cm²的量将红细胞抗体溶液喷至聚酯纤维膜上，晾干备用；

所述量子点标记物结合垫用下述方法制成：

1)取50ul、5-20mg/mL的量子点加入100ul 20mM pH＝7.2的PBS，再加入10-20μL 25％的戊二醛，混匀，室温搅拌活化3-6小时；

2)将步骤1)获得的液体用10-50mM pH＝7.2的PBS透析20-24小时，换液2-3次；

3)将鼠抗人IgG抗体用20mM pH＝7.2的PBS配成3-5mg/mL，取20μL加入步骤2)获得的液体中混匀，2-8℃搅拌反应8-12小时，20000RPM离心1-1.5小时，弃去上清液，向沉淀中加入500μL 20mM pH＝7.2的PBS，使沉淀悬浮起来，20000RPM离心1-1.5小时，弃去上清液；

4)向步骤3)得到的沉淀中加入100-200μL封闭溶液使沉淀悬浮混匀，超声分散30-60秒，4℃避光保存；封闭液的配制为20mM PBS，pH＝7.2，BSA10g/L；

5)按体积比为1：4的比例，将步骤4)获得的液体与标记物稀释液，混匀，用喷膜仪按10-20ul/cm²的量喷至聚酯纤维膜上，晾干备用；

所述层析反应膜用下述方法制成：

1)将ZnT8蛋白用0.01M，pH＝7.3的Tris-HCl稀释至浓度为0.4-0.8mg/ml为A溶液；

2)将ProteinA用0.01M，pH＝7.3的Tris-HCl稀释至浓度为1.5-3.0mg/ml为B溶液；

3)用划膜仪在硝酸纤维素膜上用A溶液划出检测线(6)，用B溶液划出质控线(7)。

2.一种检测人血液ZnT8A的量子点荧光层析免疫分析试剂的制备方法，其特征是包括如下步骤：

样品垫的制备：用0.01M，pH＝7.2的Tris-HCl作溶剂，将抗红细胞抗体配成0.1-0.2mg/ml溶液，用喷膜仪按20-50ul/cm²的量将红细胞抗体溶液喷至聚酯纤维膜上，晾干备用；

量子点标记物结合垫的制备：

1)取50ul、5-20mg/mL的量子点加入100ul 20mM pH＝7.2的PBS，再加入10-20μL 25％的戊二醛，混匀，室温搅拌活化3-6小时；

2)将步骤1)获得的液体用10-50mM pH＝7.2的PBS透析20-24小时，换液2-3次；

3)将鼠抗人IgG抗体用20mM pH＝7.2的PBS配成3-5mg/mL，取20μL加入步骤2)获得的液体中混匀，2-8℃搅拌反应8-12小时，20000RPM离心1-1.5小时，弃去上清液，向沉淀中加入500μL 20mM pH＝7.2的PBS，使沉淀悬浮起来，20000RPM离心1-1.5小时，弃去上清液；

4)向步骤3)得到的沉淀中加入100-200μL封闭溶液使沉淀悬浮混匀，超声分散30-60秒，4℃避光保存；封闭液的配制为20mM PBS，pH＝7.2，BSA10g/L；

5)按体积比为1：4的比例，将步骤4)获得的液体与标记物稀释液，混匀，用喷膜仪按10-20ul/cm²的量喷至聚酯纤维膜上，晾干备用；

层析反应膜的制备：

1)将ZnT8蛋白用0.01M，pH＝7.3的Tris-HCl稀释至浓度为0.4-0.8mg/ml为A溶液；

2)将ProteinA用0.01M，pH＝7.3的Tris-HCl稀释至浓度为1.5-3.0mg/ml为B溶液；

3)用划膜仪在硝酸纤维素膜上用A溶液划出检测线(6)，用B溶液划出质控线(7)；

在底板(1)上设置样品垫，量子点标记物结合垫(3)，层析反应膜(4)和吸水垫(5)。