[发明专利]检测人血液ZnT8A的量子点荧光层析免疫分析试剂

说明书

本发明公开了检测人血液ZnT8A的量子点荧光层析免疫分析试剂，该试剂包括底板，在底板的上面设置有样品垫，量子点标记物结合垫，层析反应膜和吸水垫，其中量子点标记物结合垫上吸附有量子点标记的鼠抗人IgG抗体，层析反应膜上有两条分别固定着ZnT8蛋白的检测线和葡萄球菌蛋白A的质控线，将待测人全血或血浆样本滴加至样品垫上后，经过3‑4分钟的层析反应，用荧光免疫分析仪检测检测线和质控线的荧光强度，即可通过内置软件计算出该样品中的锌转运蛋白8自身抗体含量。具有操作简便、反应快速、灵敏度高、特异性强等优点。

技术领域

本发明涉及免疫分析及医学检验技术领域，具体的，本发明涉及一种检测人血液锌转运蛋白8自身抗体的量子点荧光层析免疫分析试剂及制备方法。

背景技术

糖尿病是一种以高血糖为特征的代谢综合症，其主要是由于胰岛素的绝对不足，外周组织细胞对胰岛素的生物效应有抵抗性或耐受性，或者两者兼而有之。根据主要病因不同，糖尿病分为1型和2型两种。1型糖尿病是一种以胰岛β细胞选择性破坏为特征的代谢紊乱性自身免疫性疾病，主要由于基因缺陷，不能自主产生足够的胰岛素，无法让细胞对多余的血糖进行储存，人体从而出现高血糖现象并引发诸多并发症。而2型糖尿病主要是由于后天出现胰岛素抵抗作用，胰岛素分泌正常，但胰岛素受体无法正常工作，细胞无法回应胰岛素而进行多余血糖的储存，从而出现高血糖现象并引起并发症。

糖尿病是现代疾病中的第二大杀手，其对人体的危害仅次于癌症。糖尿病的直接危险包括低血糖休克，糖尿病酮症酸中毒，高血糖伴高渗非酮昏迷等。但大多数糖尿病患者的死因来自于疾病的长期并发症和后遗症。人体最易受累的是视网膜、肾脏、血管及神经组织，最终可导致失明、肾功能衰竭、肢体坏疽、多发性神经炎及心脑血管疾病等。

由于在糖尿病明确诊断以前，患者的并发症其实早已经开始，尤其1型糖尿病发病时已经有80％～90％的胰岛β细胞功能丧失，此时各种免疫干预措施均难以奏效，所以防治工作的关键在于早期诊断，争取在糖尿病前期甚至更早给予免疫干预或使用外源性胰岛素保护剩余胰岛功能。因此，应用适当的诊断标准进行早期诊断和分型，对不同类型的糖尿病采取相应的治疗措施，对糖尿病的控制以及对其并发症的治疗都是十分重要的。

锌是胰岛素储存和分泌机制中的一个重要组分,β细胞需要有效且特异的转运蛋白来累积足够量的锌。锌转运蛋白8(ZnT8)是人类1型糖尿病的主要自身抗原之一,具有高度β细胞特异性，其通过影响锌离子浓度而在胰岛素合成和分泌中发挥重要作用。锌转运蛋白8自身抗体(ZnT8A)对自身免疫性糖尿病有着重要的诊断与预测价值。

因此测定ZnT8A对临床糖尿病诊断及药物治疗效果的观察十分重要，ZnT8A是糖尿病前期个体较特异的免疫指标。ZnT8A的测定意义为：①可作为1型糖尿病的预测。ZnT8A的存在，提示胰岛β细胞的破坏及部分功能的丧失，因此对1型糖尿病的预测、诊断、治疗都有独特的价值。②从2型糖尿病患者中鉴别迟发型1型糖尿病。此类患者常可出现ZnT8A的高水平，并稳定维持，可考虑早期胰岛素干预治疗。③作为糖尿病的普查手段，ZnT8A升高就预示其内源性胰岛素的丧失，一般在糖尿病出现临床症状前数年就能检测到，以发现糖尿病的高危人群和个体。

目前对ZnT8A的检测方法主要有ELISA技术、化学发光免疫分析技术和免疫印迹技术等，如深圳市亚辉龙生物科技股份有限公司建立了一种检测人血清中ZnT8A的化学发光免疫分析方法。主要是以锌转运蛋白8包被的磁微粒作为固液分离介质，以吖啶酯标记的锌转运蛋白8为示踪物建立的双抗原夹心法化学发光体系；该方法的优点是灵敏度高、易实现自动化操作。但是该方法需要与全自动化学发光免疫分析设备相配套，成本较高。又如深圳市伯劳特生物制品有限公司公布了一种用于糖尿病自身抗体6项联检试剂盒，检测人血清中ICA、GADA、IAA、IA-2A、CpH-A和ZnT8A等6种抗体。该方法的优点是可以一次同时检测6中抗体，但是免疫印迹法的最大不足之处是灵敏度低、操作方法繁琐，且只能对自身抗体进行定性检测，无法对血清中的自身抗体进行准确定量测定，因此也就无法判断胰岛β细胞的破坏程度和自身免疫疾病的严重程度。