[发明专利]一种新型酿酒酵母表达体系及其构建方法

权利要求书

1.一种酿酒酵母表达体系，由表达载体转染宿主构成，其特征在于，所述表达载体为环状，是构建于酿酒酵母和大肠杆菌间的穿梭质粒载体，该载体从5’到3’依次包括以下可操作性元件：YEplac195质粒骨架、外源或内源基因表达盒、筛选标记基因表达盒；

所述YEplac195质粒是酵母附加体质粒，含有酵母2μ质粒的ori；

所述外源或内源基因表达盒自上游至下游依次为rDNA启动子、内部核糖体进入位点序列、外源或内源基因表达框、poly(T)序列、rDNA终止子；

所述筛选标记基因表达盒为启动子、筛选标记基因以及转录终止子；

所述外源或内源基因表达框中外源或内源基因为尿嘧啶基因或GFP基因；

所述外源或内源基因表达盒中的rDNA启动子和rDNA终止子，序列分别如SEQ ID No:1和SEQ ID No:2所示；

所述外源或内源基因表达盒中的内部核糖体进入位点序列，序列如SEQ ID No:3所示；

所述外源或内源基因表达盒中的poly(T)序列，序列如SEQ ID No:5所示；

所述的尿嘧啶基因来源于酿酒酵母，序列如SEQ ID No:4所示。

2.根据权利要求1所述的酿酒酵母表达体系，其特征在于，所述筛选标记基因表达盒中包括至少一个的筛选标记基因；所述筛选标记基因表达盒中的启动子，序列如SEQ ID NO:8所示；所述筛选标记基因表达盒中的终止子，序列如SEQ ID NO:9所示。

3.根据权利要求1所述的酿酒酵母表达体系，其特征在于，所述筛选标记基因为潮霉素B抗性基因和/或G418抗性基因；所述的潮霉素B抗性基因，序列如SEQ ID NO:6所示；所述的G418抗性基因，序列如SEQ ID NO:7所示。

4.一种权利要求1所述的酿酒酵母表达体系的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)酿酒酵母表达体系的表达载体构建；

(2)外源或内源基因表达：将基因编码框插入所述表达载体的外源基因插入酶切位点，获得重组表达载体；将所述重组表达载体转化宿主菌酿酒酵母；筛选并验证宿主菌酿酒酵母阳性转化子。

5.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，步骤(2)中重组表达载体转化宿主菌酿酒酵母的方法为PEG-LiAc转化法、电转化法以及原生质体转化法。