[发明专利]质谱法检测甲型流感病毒H5N1多重PCR产物的方法及其产品

权利要求书

1.一种非诊断目的质谱法检测流感病毒多重PCR产物的方法，包括如下步骤：

使用经设计的引物组合对流感病毒DNA进行多重PCR扩增；

将多重PCR产物通过吸附柱进行纯化；

将纯化后的多重PCR产物点样于基质结晶上，通过MALDI-TOF MS 检测多重PCR产物的片段的大小；其中，

所述引物组合物为扩增H5N1亚型甲型流感病毒的H5片段的特异性引物与扩增甲型流感病毒N1片段的特异性引物的组合，其中用于扩增H5片段的特异性引物序列为SEQ ID NO.11和SEQ ID NO .12，和，用于扩增甲型流感病毒的N1片段的特异性引物序列为SEQ ID NO.13和SEQ ID NO .14；

所述点样基质的组成为，3‐HPA∶DHC∶甲酸＝4∶2∶1。

2.权利要求1的方法，其中序列为SEQ ID NO .11，SEQ ID NO .12，SEQ ID NO .13，SEQID NO .14的引物上添加tag序列ACGTTGGATG。

3.权利要求1-2任一所述的方法，其中在所述PCR扩增的反应体系25μl中含有：

每组引物0 .5‐1μl，浓度控制在10‐20μM之间，

dNTP与Taq酶预混物12 .5μl，

DNA模板1‐3μl，

余量为双蒸水。

4.权利要求3的方法，其中在PCR扩增反应程序为：94-95℃预变性5min；94-95℃变性30s，55-60℃退火30s，72-75℃延伸40-60s，进行35-45个循环；然后，72-75℃延伸5min。