[发明专利]一种用于结核感染T细胞测定的样本处理方法和处理剂有效
申请号: | 201810071446.1 | 申请日: | 2018-01-24 |
公开(公告)号: | CN108414305B | 公开(公告)日: | 2020-08-04 |
发明(设计)人: | 谭玉华;王银德;赵凡一;毛静宜 | 申请(专利权)人: | 广州市丰华生物工程有限公司 |
主分类号: | G01N1/28 | 分类号: | G01N1/28;G01N1/38;G01N33/569;C12Q1/02 |
代理公司: | 广州三环专利商标代理有限公司 44202 | 代理人: | 宋静娜;郝传鑫 |
地址: | 510000 广东*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 用于 结核 感染 细胞 测定 样本 处理 方法 | ||
1.一种用于结核感染T细胞测定的样本处理方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)采集2~5mL外周血样本,并在样本中加入抗凝剂;
2)将20~100μL样本处理剂加入到步骤1)采集的样本中,混合均匀,其中,所述处理剂包括偶联γ-干扰素抗体的磁珠,所述磁珠与γ-干扰素抗体的质量比为1:0.02~0.5;
3)样本室温静置15~80min后,混合均匀,置于磁力分离架上静置70~200s,取样本上部的全血进行培养分析。
2.根据权利要求1所述的用于结核感染T细胞测定的样本处理方法,其特征在于,所述处理剂包括处理剂稀释液,所述稀释液为0.85%的生理盐水。
3.根据权利要求1所述的用于结核感染T细胞测定的样本处理方法,其特征在于,所述磁珠与γ-干扰素抗体的质量比为1:0.1。
4.根据权利要求1所述的用于结核感染T细胞测定的样本处理方法,其特征在于,所述磁珠为羧基磁珠,磁珠的粒径为500~5000nm。
5.根据权利要求1所述的用于结核感染T细胞测定的样本处理方法,其特征在于,所述磁珠的粒径为1500nm。
6.根据权利要求1所述的用于结核感染T细胞测定的样本处理方法,其特征在于,所述处理剂的制备方法包括以下步骤:
(1)配制处理剂稀释液;
(2)活化磁珠微粒;
(3)磁珠微粒与抗体偶联。
7.根据权利要求6所述的用于结核感染T细胞测定的样本处理方法,其特征在于,所述步骤(2)中,取10mg磁珠,用MES缓冲液洗涤3次,洗涤后用MES缓冲液重悬,加入1-乙基-3-3-二甲基氨丙基碳化二亚胺活化磁珠,1-乙基-3-3-二甲基氨丙基碳化二亚胺与磁珠的质量比为1~10:1,活化反应30min后,磁分离,吸去上清液,用MES缓冲液清洗4次,得到活化磁珠,所述MES缓冲液的浓度为0.01~0.1M,pH为4.5~7.2。
8.根据权利要求6所述的用于结核感染T细胞测定的样本处理方法,其特征在于,所述步骤(3)中,将γ-干扰素抗体加至MES缓冲液中配制成为抗体液,将抗体液与步骤(2)得到的活化磁珠混合,偶联反应16~24h后,磁分离,吸去上清液,用MES缓冲液清洗2次后,加5mL浓度为1M,pH 8.0的甘氨酸淬灭液,混匀30min后,磁分离,吸去上清液,用MES缓冲液洗涤3次后,用MES缓冲液重悬,置于2~8℃保存,得到所述偶联γ-干扰素抗体的磁珠。
9.根据权利要求1所述的用于结核感染T细胞测定的样本处理方法,其特征在于,所述步骤3)中,样本室温静置30min后,混合均匀,置于磁力分离架上静置120s,取样本上部的全血进行培养分析。
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