[发明专利]一种用于结核感染T细胞测定的样本处理方法和处理剂

说明书

本发明公开了一种用于结核感染T细胞测定的处理剂及样本处理方法，所述处理剂包括偶联γ‑干扰素抗体的磁珠，所述磁珠与γ‑干扰素抗体的质量比为1：0.02～0.5。本发明处理剂以磁珠作为载体，磁珠偶联γ‑干扰素抗体，抗体可以结合血样中的γ‑干扰素，形成γ‑干扰素‑抗体‑磁珠微粒复合物，在磁力分离的作用下，复合物随磁珠微粒与血液分离，实现去除血液γ‑干扰素的目的。本发明的处理方法可批量处理样本，简单、快速，采用均相免疫反应和磁力分离技术，能彻底消除样本γ‑干扰素的干扰。

技术领域

本发明涉及生化试剂技术领域，具体涉及一种用于结核感染T细胞测定的样本处理方法和处理剂。

背景技术

γ-干扰素体外释放试验(interferon-gamma release assays，IGRAs)是检测结核分枝杆菌感染，巨细胞病毒(Cytomegaoviyns，CMV)感染以及贝氏柯克氏体感染的有效方法，现临床上主要应用于结核分枝杆菌的辅助诊断。

结核病严重危害公共安全，全世界每年有200万人死于结核病。在中国，每年有100万的新增结核病人。结核分枝杆菌侵入人体时，首先面对的是第一道防线天然免疫。大多数情况下，天然免疫可将结核分枝杆菌清除。在结核分枝杆菌菌体数量过多、毒力较强或者天然免疫免疫系统状态较差时，部分结核分枝杆菌会突破第一道防线，面对免疫系统的第二道防线，即获得性免疫。此时抗原呈递细胞会识别入侵的病原体，将信息传递给T淋巴细胞和B淋巴细胞，从而启动免疫反应，清除菌体。初始T淋巴细胞会活化成为效应T淋巴细胞，释放γ-干扰素以及其他细胞因子，参与菌体清除过程。TB-IGRAs试验中，将来自结核分枝杆菌的抗原与外周血共培养，如果外周血中存在结核感染效应T淋巴细胞，则这些细胞会被激活并释放γ-干扰素，否则不会释放γ-干扰素。结核感染T细胞(TB-IGRAs)检测使用的ESAT-6和CFP-10抗原来自结核分枝杆菌基因组RD1区。根据全基因组研究的结果，RD1区在卡介苗和绝大多数非结核分枝杆菌中不存在。因此TB-IGRAs可以排除卡介苗和绝大多数非结核分枝杆菌的干扰，为医生提供结核分枝杆菌感染的证据。

结核分枝杆菌的镜检是最常用的诊断结核病的方法，但是该方法的阳性率低。结核分枝杆菌的培养是确定结核病的金标准，但是由于结核分枝杆菌的生长速度慢，试验周期长(2～3周)，不能满足临床的要求。另外，结核病还可以通过胸透、核酸检测和体格检查等方法确认。潜伏性结核菌感染是宿主感染结核分枝杆菌后的一种特殊状态，感染者体内的结核分枝杆菌处于持留状态，不能诊断为活动性结核病，但具有发展为活动性结核病的风险。对潜伏性结核菌感染的高危人群进行早期诊断和适当干预，在结核病控制中具有积极意义。结核菌素试验是唯一可以诊断潜伏性结核菌感染的方法，在结核杆菌感染后2～10周内结核菌素试验转为阳性。然而，有些感染者对结核菌素是没有反应的，这些人群中既包括那些各种原因导致免疫抑制者，也包括一些没有免疫抑制的人。此外，接种卡介苗，感染非致病性分枝杆菌，以及其他因素，会导致非结核菌感染者结核菌素试验呈阳性。PCR是近些年技术发展更新最快的方法，在美国已经纳入到结核病诊断依据中，对于涂阴培阳患者灵敏度特异性都比较高，但存在的问题是，肺结核患者中有一半以上的菌阴肺结核，标本中不含有菌体，而对于肺外结核则更为困难，导致PCR类方法会出现假阴性。同时分子生物学方法操作相对繁琐，可能会存在污染而导致的假阳性。而TB-IGRAs采用的是外周血，不需要找到结核菌的DNA或RNA，因此可不受患者是否排菌以及病变部位的限制。同时TB-IGRAs仅需24小时即可出结果，也是目前针对结核感染灵敏度最高的检测手段。因此TB-IGRAs已在呼吸科、感染科、风湿免疫科、消化科和儿科普遍应用，用于潜伏性结核感染、菌阴结核病和肺外结核的诊断。