[发明专利]一种甘松活性成分的定量检测方法及甘松活性成分与应用

权利要求书

1.一种甘松活性成分的定量检测方法，其特征在于：包括如下步骤：

(a)混合标准对照品溶液的制备：取去氧甘松香醇A、蒙花苷、异甘松新酮、甘松新酮、甘松香酮H及(-)-马兜铃酮，精密称定，加甲醇溶解，配制成去氧甘松香醇A、蒙花苷、异甘松新酮、甘松新酮、甘松香酮H及(-)-马兜铃酮的混合标准对照品溶液，即得；

(b)供试品溶液的制备：取甘松粉末，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇称定重量，浸泡，超声处理，放冷后滤过，用甲醇补足减失的重量，量取续滤液，摇匀，即得；

(c)色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为A流动相，以0.05％甲酸水为B流动相；其体积配比为流动相A相：流动相B相为10-95：90-5，进行线性梯度洗脱；柱温35-45℃；流速0.2-0.4mL/min；进样量3μL，检测波长280nm，理论板数按甘松新酮峰计算应不低于5000；

(d)色谱峰测定：分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各3μL，注入超高效液相色谱仪，计算同一保留时间下的峰面积，代入标准曲线方程，即计算出去氧甘松香醇A、蒙花苷、异甘松新酮、甘松新酮、甘松香酮H及(-)-马兜铃酮的含量。

2.根据权利要求1所述的甘松活性成分的定量检测方法，其特征在于：所述步骤(a)混合标准对照品溶液的制备中，去氧甘松香醇A浓度为21-1394μg/mL、蒙花苷浓度为17-1142μg/mL、异甘松新酮浓度为17-1097μg/mL、甘松新酮浓度为122-7820μg/mL、甘松香酮H浓度为82-5250μg/mL、(-)-马兜铃酮浓度为41-2632μg/mL。

3.根据权利要求1所述的甘松活性成分的定量检测方法，其特征在于：所述步骤(b)供试品溶液的制备中，甘松粉末过40目筛；所用甲醇为20倍于甘松样品的重量；超声处理的功率300-600W，频率为40-60kHz，处理时间为120-180min。

4.根据权利要求1所述的甘松活性成分的定量检测方法，其特征在于：所述步骤(c)的色谱条件为：所述填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶桥式亚乙基杂化颗粒，所述流动相A相为乙腈，所述流动相B相为0.05％甲酸水，其流动相所采用的线性梯度洗脱条件为：0min→13min→21min→26min，流动相A所占的体积比为：10％→40％→50％→95％，流动相B所占的体积比为：90％→60％→50％→5％；流速0.3mL/min；柱温40℃。

5.根据权利要求1所述的甘松活性成分的定量检测方法，其特征在于：所述步骤(d)中具体测定法为：分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各3μL，注入超高效液相色谱仪，计算同一保留时间下的峰面积，代入标准曲线方程，即计算出去氧甘松香醇A、蒙花苷、异甘松新酮、甘松新酮、甘松香酮H及(-)-马兜铃酮的含量；甘松样品中，去氧甘松香醇A的含量范围为0.15-0.55mg/g、蒙花苷的含量范围为0.05-0.58mg/g、异甘松新酮的含量范围为0.06-0.47mg/g、甘松新酮的含量范围为1.18-20.01mg/g、甘松香酮H的含量范围为1.73-8.59mg/g、(-)-马兜铃酮的含量范围为2.23-8.07mg/g。

6.根据权利要求1所述的甘松活性成分的定量检测方法，其特征在于：所述标准曲线方程的绘制：将上述制备的混合标准对照品溶液稀释0、2、4、8、16、32、64倍，分别注入工作状态的UPLC系统，进样为3μL，分别计算同一保留时间下的峰面积，以浓度x为横坐标，以峰面积y为纵坐标绘制标准曲线。做出标准曲线方程：y＝f(x)，r值评价其线性关系是否良好。

7.权利要求1所述定量检测方法中甘松活性成分的应用，其特征在于：所述去氧甘松香醇A、蒙花苷、异甘松新酮、甘松新酮、甘松香酮H及(-)-马兜铃酮在制备5-羟色胺转运体活性调节剂方面的应用。