[发明专利]一种制备酰基-酰基载体蛋白的方法有效
| 申请号： | 201810072465.6 | 申请日： | 2018-01-25 |
| 公开（公告）号： | CN110079572B | 公开（公告）日： | 2023-01-13 |
| 发明（设计）人： | 薛松;丁威;冯延宾;曹旭鹏 | 申请（专利权）人： | 中国科学院大连化学物理研究所 |
| 主分类号： | C12P21/02 | 分类号： | C12P21/02;C12N15/70 |
| 代理公司： | 沈阳科苑专利商标代理有限公司 21002 | 代理人： | 马驰 |
| 地址： | 116023 辽宁*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 制备 载体 蛋白 方法 | ||
1.一种制备酰基-酰基载体蛋白(acyl-ACP，酰基-ACP)的方法，其特征在于：
以脂肪酸盐及酰基载体蛋白（ACP）为底物，使用脂酰-ACP 合成酶，以二硫苏糖醇（DTT）为保护剂，在缓冲溶液中，添加三磷酸腺苷（ATP）、以及镁离子和锂离子，在常温条件下进行合成酰基-酰基载体蛋白反应；
所述的酰基载体蛋白为
所述脂酰-ACP 合成酶是指
所述ATP在反应体系中浓度为5-10 mM；
所述镁离子浓度范围在5-20 mM，锂离子浓度范围在5-20 mM；
所述脂肪酸盐指链长为C16-C18的脂肪酸钠盐或脂肪酸钾盐中的一种或二种，反应体系中添加的脂肪酸盐的浓度为10-500 µM。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：反应体系中添加的酰基载体蛋白的浓度为10-200 µM。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：脂酰-ACP 合成酶是指具有催化脂肪酸盐与酰基载体蛋白合成酰基-酰基载体蛋白作用， 根据反应体系的大小，每50 µL反应体系中添加0.1-1 µg酶。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于：缓冲溶液的体系是以1-5 mMDTT为保护剂，缓冲pH范围在5.5-8.5的Tris-HCl缓冲液。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的常温条件下是指4度到40度自然条件温度。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述反应体系中添加的镁离子和锂离子是以它们的硫酸镁或硫酸锂或氯化镁或氯化锂的形式加入其中的一种或二种以上。
7.如权利要求1、3或4所述的方法，其特征在于：所述活性形式的酰基载体蛋白，其基因GenBank: CP025268构建于pET-28a+(Novagen)表达载体上，在大肠杆菌中表达并提取纯化后获得；
所述的脂酰-ACP 合成酶，其基因GenBank: CP014038构建于pET-28a+(Novagen) 表达载体上，在大肠杆菌中表达并提取纯化后获得。
8.如权利要求1所述的方法，其特征在于：
所述缓冲溶液的体系为25 mM Tris-HCl pH 7.5，2 mM DTT；所述常温条件为30度；
所述体系中添加的镁离子和锂离子来源为氯化镁及硫酸锂。
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