[发明专利]一种多颜色可视化快速检测海产品中石房蛤毒素的方法在审
| 申请号： | 201810072985.7 | 申请日： | 2018-01-25 |
| 公开（公告）号： | CN108181462A | 公开（公告）日： | 2018-06-19 |
| 发明（设计）人： | 付凤富;林玲;程贤 | 申请（专利权）人： | 福州大学 |
| 主分类号： | G01N33/543 | 分类号： | G01N33/543 |
| 代理公司： | 福州元创专利商标代理有限公司 35100 | 代理人： | 蔡学俊;林文弘 |
| 地址： | 350108 福建省福*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 石房蛤毒素 海产品 快速检测 多颜色 可视化 高通量检测 大型仪器 低成本 筛查 可视化检测 技术难题 纳米金棒 灵敏度 高通量 检测 抗体 耗时 灵敏 分析 开发 | ||
1.一种多颜色可视化快速检测海产品中石房蛤毒素的方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）高通量检测板的制备：在96孔酶标板的反应孔中加100微升浓度为10 ppm的羊抗兔二抗缓冲溶液，在4℃下放置24小时使羊抗兔二抗包被在反应孔表面，然后弃去反应孔中的溶液，用PBST缓冲液洗涤反应孔三次，然后加入200 微升包含2wt%牛血清白蛋白的PBST缓冲液在37 ℃下进行封闭1小时，之后用PBST缓冲液洗涤三次，拍干酶标板，4℃保存待用；
（2）石房蛤毒素的多颜色区分可视化检测：在（1）所制备的酶标板反应孔中加入50微升石房蛤毒素标准溶液或样品溶液，同时加入50微升标记有辣根过氧化酶的石房蛤毒素溶液和50微升用pH=9.6，0.05 M的碳酸盐缓冲溶液稀释12800倍的石房蛤毒素抗体溶液，用封口膜把酶标板盖上，轻轻的震荡酶标板30秒使孔内的溶液混匀，在室温下孵育30分钟后，把封口膜取掉，将微孔中的溶液拍干，用250微升的PBST缓冲液洗板3次，拍板，去掉残留的洗液，接着，在每个反应孔中加入100微升的TMB显色液底物，用封口膜把酶标板盖上，轻轻地震荡酶标板30秒使里面的溶液混匀，不要使液体洒出，室温孵育30分钟，使辣根过氧化酶催化氧化TMB底物，然后加入20 微升浓度为2 M的盐酸终止反应，最后加入80微升用十六烷基三甲基溴化铵稳定的金纳米棒溶液，10分钟后肉眼观察溶液的颜色，对比标准溶液对样品中石房蛤毒素的浓度进行可视化检测；
（3）海产品样品的检测：称取 0.1 g 干燥后的海产品样品，简单磨碎后，加入3 毫升80wt% 的甲醇溶液，超声提取10分钟，过滤收集滤液，残留用2毫升80wt%的甲醇重复提取1次，合并提取液，提取液按步骤（2）进行检测，以实现对海产品中石房蛤毒素的测定。
2.根据权利要求1所述的一种多颜色可视化快速检测海产品中石房蛤毒素的方法，其特征在于，步骤（1）中羊抗兔二抗缓冲溶液是将羊抗兔二抗溶解于pH=9.6，0.05 M的碳酸盐缓冲溶液中。
3.根据权利要求1所述的一种多颜色可视化快速检测海产品中石房蛤毒素的方法，其特征在于，步骤（1）和（2）中所用的PBST缓冲液的pH 均为7.4。
4.根据权利要求1所述的一种多颜色可视化快速检测海产品中石房蛤毒素的方法，其特征在于，步骤（2）中金纳米棒的长60nm，宽15nm。
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