[发明专利]前列腺酸性磷酸酶/粒-巨噬细胞集落刺激因子制备方法有效
| 申请号： | 201810073775.X | 申请日： | 2018-01-25 |
| 公开（公告）号： | CN110079539B | 公开（公告）日： | 2022-07-01 |
| 发明（设计）人： | 陈国友 | 申请（专利权）人： | 上海惠盾因泰生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/62 | 分类号： | C12N15/62;C12N9/16;C12N5/10;C07K14/535 |
| 代理公司： | 上海一平知识产权代理有限公司 31266 | 代理人： | 肖艳;徐迅 |
| 地址： | 200120 上海市浦东新区中国（上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 前列腺 酸性磷酸酶 巨噬细胞 集落刺激因子 制备 方法 | ||
1.一种用于编码前列腺酸性磷酸酶/粒-巨噬细胞集落刺激因子PAP/GM-CSF的核苷酸分子，其特征在于，所述核苷酸分子编码SEQ ID NO.: 1所示的氨基酸序列，所述核苷酸序列如SEQ ID NO.: 2所示。
2.一种载体，其特征在于，所述载体含有如权利要求1所述的核苷酸分子。
3.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞含有权利要求2所述的载体或其染色体中整合有外源的权利要求1所述的核苷酸分子，所述宿主细胞为CHO细胞。
4.一种重组前列腺酸性磷酸酶/粒-巨噬细胞集落刺激因子PAP/GM-CSF的制备方法，其特征在于，包括步骤：
(a)培养权利要求3所述的宿主细胞，从而表达重组融合蛋白前列腺酸性磷酸酶/粒-巨噬细胞集落刺激因子PAP/GM-CSF；和
(b)分离出表达的重组融合蛋白前列腺酸性磷酸酶/粒-巨噬细胞集落刺激因子PAP/GM-CSF。
5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(a)中，还包括将所述宿主细胞接种到培养基中，接种密度为2×105-3×105 细胞/mL。
6.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(a)中，所述重组融合蛋白的表达量在150 mg/L以上。
7.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，在步骤(a)中，利用含有葡萄糖的培养基培养所述宿主细胞，并且培养过程中维持培养基中的葡萄糖浓度为4.5-5.5 mmol/L。
8.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述方法还包括步骤：(c)纯化所述重组融合蛋白，所述纯化包括：阴离子交换柱纯化、分子筛柱纯化、或其组合。
9.如权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述纯化包括通过Q Sepharose(HP)层析柱对所述重组融合蛋白进行纯化。
10.如权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述纯化还包括采用pH8.0，20mMTris/HCl 1M的NaCl梯度线性洗脱。
11.如权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述纯化包括通过Superdex 200层析柱对所述重组融合蛋白进行纯化。
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