[发明专利]一种K亚群禽白血病病毒检测试剂盒

权利要求书

1.一种用于检测K亚群禽白血病病毒的遗传标记物，其具有SEQ ID NO.1所示的序列或其特异性片段。

2.用于扩增权利要求1所述遗传标记物的特异性引物。

3.根据权利要求2所述的特异性引物，其核苷酸序列为：

F1:5'-CAGACAGGTTCTCGCTTCCG-3'，

R1:5'-CCATATACCTCCTGTGCGTGT-3。

4.含有权利要求2或3所述的特异性引物的检测试剂盒。

5.含有权利要求2或3所述的特异性引物的试剂盒。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，该试剂盒的工作程序为：95℃预变性3min；95℃ 15s、60℃ 34s，40个循环，每个循环60℃时收集荧光；95℃15s、60℃1min，95℃15s；该试剂盒中20μL的反应体系为10μM的上游引物0.5μL，10μM的下游引物0.5μL，2×iTaqUniversal SYBR Green Supermix 10μL，cDNA模板1μL，RNase free H2O 8μL。

7.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，该试剂盒可用于检测K亚群禽白血病病毒，若待测样品Ct值大于或等于35时，则待测样品中K亚群禽白血病病毒为阴性。

8.一种K亚群禽白血病病毒的检测方法，其特征在于，以样品总DNA为模板，以权利要求1所述的遗传标记物为靶序列，利用权利要求2或3所述的引物进行实时荧光定量PCR，根据扩增曲线判定结果。

9.如权利要求8所述的K亚群禽白血病病毒的检测方法，其特征在于，实时荧光定量PCR的20μL的反应体系为10μM的上游引物0.5μL，10μM的下游引物0.5μL，2×iTaq UniversalSYBR Green Supermix 10μL，cDNA模板1μL，RNase free H2O 8μL。

10.根据权利要求8或9所述的方法，其特征在于，所述实时荧光定量PCR的反应程序为：95℃预变性3min；95℃ 15s、60℃ 34s，40个循环，每个循环60℃时收集荧光；95℃ 15s、60℃ 1min，95℃ 15s。