[发明专利]一种快速检测藻细胞破裂程度的方法

说明书

本发明提供了一种快速检测微藻细胞破裂程度的方法，包括以下步骤：1)制备破碎处理的藻悬液待测样品；2)离心所述破碎藻悬液待测样品，获得上清液；测定所述步骤2)获得的上清液在425～450nm波长处的吸光度A_x或在670～690nm波长处的吸光值A_x’，根据预定的两处波长吸光度值对应的标准曲线计算得到待测样品的微藻细胞破裂程度CD_x；所述标准曲线的获得方法为：测定破碎藻悬液在所述波长处的吸光度值、采用计数法计算得到所述藻悬液细胞的破裂程度，根据所述破碎藻悬液的吸光度值和细胞破裂程度，线性拟合得到标准曲线。本发明所述的方法简单、快速，并且测定结果稳定可靠。

技术领域

本发明属于微藻资源化利用领域技术领域，具体涉及一种快速检测藻细 胞破裂程度的方法。

背景技术

微藻是一类在河湖、海洋分布广泛，营养丰富、光合利用度高的自养生 物，细胞代谢产生的多糖、蛋白质、色素等，使其在食品、医药、基因工程、 液体燃料等领域具有很好的开发前景。微藻生长周期短，能够快速培育获得， 已经被认为是一种新型可再生资源，具有极高的利用价值，尤其是能够用于 获取高附加值产物，如维生素、高级脂肪酸、生物活性物质等。有些微藻含 脂量高达70％，甚至更高，是一种有效的生物柴油原料。然而，微藻的细胞 体积较小，细胞壁较厚，导致直接从完整的细胞中提取胞内物质通常需要大 量的能耗，这使得获取胞内物质的成本高昂，阻碍了微藻资源化利用的工业 化进程。

研究表明，将微藻预处理破裂后，能够快速有效地获取胞内物质。然而， 微藻预处理破裂过程中存在藻细胞裂解不充分目标产物不能完全提取出来， 或者藻细胞裂解过度导致目标产物被破坏的问题，不利于整个微藻资源化利 用过程。如何快速有效地监测预处理过程中藻细胞破裂程度成为急需解决的 问题。目前，国内外学者对于微藻预处理破裂过程中藻细胞破裂程度的检测 方法大多采用镜检法，如采用血球计数板进行显微观察计数。该方法通常耗 时耗力，且不同技术程度的人员观察计数结果之间具有差异，结果不稳定，无法快速、广泛运用于实际生产中。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种简单、快速稳定的检测微藻细胞 破裂程度的方法。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：一种快速检测微藻 细胞破裂程度的方法，包括以下步骤：1)制备破碎处理的藻悬液待测样品； 2)离心所述破碎处理的藻悬液待测样品，获得上清液；测定所述步骤2)获 得的上清液在425～450nm波长处的吸光度A_x或在670～690nm波长处的吸光值 A_x^’，根据预定的两处波长吸光度值对应的标准曲线计算得到待测样品的微藻细 胞破裂程度CD_x；

所述标准曲线的获得方法为：测定破碎藻悬液标样在所述波长处的吸光 度值、采用计数法计算得到所述破碎藻悬液标样的细胞破裂程度，根据所述 破碎悬浮标样的吸光度值和破裂程度，线性拟合得到标准曲线。

优选的，步骤2)中所述离心的转速为10000～15000g。

优选的，步骤2)中所述离心时间为10～30min。

优选的，步骤3)中检测上清液吸光度的波长为430～440nm或675～685nm。

优选的，所述破碎藻悬液标样由超声波处理初始未破裂藻悬液样品不同 时间获得所述不同破裂程度的微藻标样。

优选的，未经过超声波处理的藻悬液的初始细胞浓度为10³～10⁷cells/mL。

优选的，步骤2)中所述的超声波的频率为20～40kHz。

优选的，步骤2)中所述超声波的功率为0.01～0.1W/cm³。