[发明专利]利用双三元泵在线检测血液中卡马西平药物含量的方法

权利要求书

1.一种利用双三元泵在线检测血液中卡马西平药物含量的方法，其特征在于：它包括以下步骤：

(一)标准溶液的标定

首先将至少三种不同浓度的标准工作液10μL和90μL的由1∶1的甲醇和水组成的稀释液分别置于1.5mL离心管中混合制成至少三种标准溶液，上述标准溶液分别在转速为800-1200rpm下涡旋混匀1-2min后，用高效液相色谱分析仪和DAD检测器对上述至少三种标准溶液进行检测，得出上述至少三种标准溶液的卡马西平色谱图，以上述至少三个标准溶液的卡马西平峰面积作为标准曲线图的纵坐标y，以上述标准工作液中含有卡马西平的浓度作为标准曲线图的横坐标x，将以上检测所得至少三组数据进行线性回归，拟合得到标准曲线方程为y＝a*x+b，并且得出权重系数a和b；所述标准工作液为含有卡马西平的溶液；

(a)标准工作液的配制：

精确称取卡马西平标准品15mg置于10mL容量瓶，用甲醇进行溶解，并定容于10mL，得到标准储备液，将标准储备液用含水量为20％-60％的甲醇溶液的稀释液进行稀释，分别在含有5-400mg/L卡马西平的范围内配置出各标准工作液，并在-80℃条件下保存；

(二)检测血液的离心

取待检测血液至少5mL，在离心速度为3500rpm下离心10min，取上清液得血清或血浆，上述血清或血浆置于-20℃冷冻下保存至分析前备用；

(三)待测样品处理

(b)用一次性无菌注射器吸取步骤(二)中的血清或血浆350μL，然后将上述无菌注射器前端连接针孔滤膜，将上述血清或血浆进行过滤后，将其移入1.5mL管中，得到待测样品；

(四)待测样品的检测

使用高效液相色谱分析仪和DAD检测器对上述步骤(b)待测样品100μL进行检测，得出上述待测样品的卡马西平色谱图，将上述色谱图中的卡马西平峰面积y代入上述步骤(一)的标准曲线方程中，通过计算得到待检测样品中目标物浓度x，即为待检测血液中的卡马西平药物浓度；

高效液相色谱分析仪包括：双三元泵、在线过滤器、SPE柱和色谱柱；标准工作液和待测样品分别通过双三元泵依次进入在线过滤器、SPE柱和色谱柱。

2.如权利要求1所述的利用双三元泵在线检测血液中卡马西平药物含量的方法，其特征在于：在步骤(一)中使用七种不同浓度的标准工作液，七种不同浓度的标准工作液分别为含有5.00、10.00、20.00、40.00、80.00、160.00、320.00mg/L浓度的卡马西平溶液。

3.如权利要求2所述的利用双三元泵在线检测血液中卡马西平药物含量的方法，其特征在于：在步骤(a)中用由1∶1的水和甲醇组成的稀释液进行稀释。

4.如权利要求3所述的利用双三元泵在线检测血液中卡马西平药物含量的方法，其特征在于：所述SPE柱为资生堂公司的C18MG S-3。

5.如权利要求3所述的利用双三元泵在线检测血液中卡马西平药物含量的方法，其特征在于：所述色谱柱为AgiLent公司的Extend-C18，在线过滤器为AgiLent 1290InfinityinLine fiLter。

6.如权利要求3所述的利用双三元泵在线检测血液中卡马西平药物含量的方法，其特征在于：所述高效液相色谱仪设置的柱温为30℃。

7.如权利要求3所述的利用双三元泵在线检测血液中卡马西平药物含量的方法，其特征在于：所述高效液相色谱仪所使用流动相为甲醇-水，并且双三元泵采用梯度洗脱，流速为1mL/min，进样量为10uL。

8.如权利要求4至7之一所述的利用双三元泵在线检测血液中卡马西平药物含量的方法，其特征在于：所述DAD检测器的检测波长为318nm，采集频率为5Hz，响应常数为1s。

9.如权利要求8所述的利用双三元泵在线检测血液中卡马西平药物含量的方法，其特征在于：所述含水量为体积比的含水量。