[发明专利]一种鲍鱼血细胞处理方法

权利要求书

1.一种鲍鱼血细胞处理方法，其特征在于，所述处理方法包括如下步骤：

（1）首先在 2ml 离心管中加入 1ml 抗凝保护剂；

（2）然后用解剖刀划开鲍鱼腹足部血窦，将鲍鱼倾斜 20-30°放在冰上以便血液更易流出； （3）待血液流出，用无菌注射器抽 1ml 血直接注入到加入抗凝保护剂后的离心管中；所述抗凝保护剂由以下成分组成：氯化钠 2.45~2.55g、EDTA 0.9~1.1g、1，4-哌嗪二乙磺酸0.22~0.24g 和 0.1mM PBS 100ml；

（4）用一种用于流式细胞仪检测的血液过滤器过滤步骤（3）中液体到新的2ml 离心管中； （5）再经 18℃，3000rpm 离心 10min，去掉上清；

（6）最后用 1ml 滤菌海水重新悬浮经过步骤（5）处理的血细胞制成鲍血淋巴悬液。

2.根据权利要求 1 所述的鲍鱼血细胞处理方法，其特征在于，所述抗凝保护剂的制备方法为：

（1）将 0.1mM PBS 缓冲液倒入烧杯中，再向烧杯中加入固体氯化钠粉末搅拌 3-5 分钟，直到氯化钠全部溶解，然后再加入 1，4-哌嗪二乙磺酸粉末充分搅拌溶解得混合溶液A； （2）将混合溶液 A 放入 38-40℃水浴锅中加热，再缓慢加入 EDTA，边加入边搅拌，直到EDTA 完全溶解得混合溶液 B；

（3）将混合溶液 B 转到室温状态下用磁力搅拌器搅拌 0.5-1h，使各组分充分溶解到PBS 缓冲液中；

（4）超净工作台开启紫外杀菌功能 30-35min，然后在超净工作台上将混合溶液 B 先用 0.45um 无菌滤器过滤除杂放入灭菌蓝盖瓶中，再用 0.22um 无菌滤器将蓝盖瓶中液体过滤除菌，最终得到鲍鱼血细胞抗凝保护剂。

3.根据权利要求 1 所述的鲍鱼血细胞处理方法，其特征在于，所述血液过滤器包括固定台（1）、竖杆（2）、过滤装置（3）和置物装置（4），所述置物装置（4）放置于过滤装置（3）的下方，所述过滤装置（3）通过压圈杆（5）安装在竖杆（2）上，所述压圈杆（5）通过高度调节钮（14）安装在竖杆（2）上，所述竖杆（2）安装在固定台（1）上，所述过滤装置（3）包括上压圈（6）和下压圈（7），所述上压圈（6）和下压圈（7）均和压圈杆（5）连接，所述上压圈（6）与下压圈（7）之间设置有筛绢。

4.根据权利要求 3 所述的鲍鱼血细胞处理方法，其特征在于，所述上压圈（6）上设置有四个压扣（8），四个压扣均布在所述上压圈（6）的外围。

5.根据权利要求 4 所述的鲍鱼血细胞处理方法，其特征在于，所述上压圈（6）上设置有格口网（13），所述格口网（13）具有四个方形网格。

6.根据权利要求 3 所述的鲍鱼血细胞处理方法，其特征在于，所述置物装置（4）包括置物盒（9）和离心管（10），所述离心管（10）放置在置物盒（9）中。

7.根据权利要求 6 所述的鲍鱼血细胞处理方法，其特征在于，所述置物盒（9）内设置有圆柱状凹槽（11），所述圆柱状凹槽（11）中放置有冰块。

8.根据权利要求 7 所述的鲍鱼血细胞处理方法，其特征在于，所述圆柱状凹槽（11）中设置有两个隔离片（12），两个隔离片（12）垂直交叉设置。

9.根据权利要求 4 所述的鲍鱼血细胞处理方法，所述压扣（8）的材质为塑料，所述上压圈（6）和下压圈（7）的材质均为不锈钢，所述固定台（1）为菱形铁制固定台。