[发明专利]用激光共聚焦显微镜和荧光染料观察AM真菌丛枝结构的方法

权利要求书

1.用激光共聚焦显微镜和荧光染料观察AM真菌丛枝结构的方法，其特征在于包括以下步骤：

1）AM真菌与共生植物根系建立共生体；

2）利用荧光染料WGA-Alexa fluor488 溶液处理AM真菌根组织，分段后置于载玻片上，并用盖玻片封片；

3）利用激光共聚焦显微镜观察收集图像及进行图像处理。

2.如权利要求1所述的用激光共聚焦显微镜和荧光染料观察AM真菌丛枝结构的方法，其特征在于所述的步骤1）具体为：将生根3个星期的共生植物，从MS琼脂培养基中取出，转移到含有MS培养基的培养皿上，同时接种上与胡萝卜根侵染的丛枝菌根真菌孢子或菌丝，进行共生培养。

3.如权利要求1所述的用激光共聚焦显微镜和荧光染料观察AM真菌丛枝结构的方法，其特征在于所述的步骤2）具体为：

a、将步骤1）得到的AM真菌侵染的植物根浸泡于50%乙醇1小时；

b、用水清洗后，放入20%KOH溶液中90℃保温2小时，再分别用蒸馏水和PBS缓冲溶液洗涤；

c、将洗涤后的AM真菌侵染的植物根培养在含有浓度为5ug/ml的WGA-Alexa fluor488溶液的培养皿中过夜；

d、把含有WGA-Alexa fluor488的根切成4毫米长的片段，再把4毫米根段组织放置于厚度在0.8～1.2mm之间载玻片上，用厚度在0.17mm盖玻片封片。

4.如权利要求1所述的用激光共聚焦显微镜和荧光染料观察AM真菌丛枝结构的方法，其特征在于所述的步骤3）具体为：根片段用Leica TCS-SP5共聚焦显微镜用20倍或63倍水浸式目镜观察成像，同时根据荧光收集不同干扰比对图像DIC，激光488nm，photo counting610，扫描时间35.18秒，Pixel Dwell 38.49秒,Pixel size 0.21um，Frame mode，扫描区域图像大小139.3×104.6um，光学截图用0.08um 间隔收集并叠加，图像用Leica LAS-AF软件2.6.0处理。