[发明专利]一种精子体外获能液、用于体外受精的试剂盒及哺乳动物体外受精方法

权利要求书

1.一种精子体外获能液，其特征在于，包括NaCl 110～140mmol、KCl 2.40～2.95mmol、NaHCO₃ 22.5～27.5mmol、葡萄糖4.8～6.0mmol、丙酮酸钠0.22～0.30mmol、牛磺酸0.22～0.30mmol、肾上腺素0.04～0.06mmol、BSA 14～16mg/ml、MgCl₂ 0.4～0.6mmol、CaCl₂ 1.6～2.0mmol、DL-乳酸钠溶液8～12mmol，pH值为7.35±0.10。

2.如权利要求1所述的精子体外获能液，其特征在于，还包括酚红及青霉素G、硫酸链霉素。

3.一种用于体外受精的试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1或2所述的体外获能液，还包括体外受精液，所述体外受精液包括：BSA28～32mg/ml，其余组分同体外获能液。

4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，还包括矿物油、孕马血清促性腺激素和绒毛膜促性腺激素。

5.如权利要求4所述的试剂盒在哺乳动物体外受精中的应用。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述哺乳动物为长爪沙鼠。

7.一种哺乳动物体外受精方法，其特征在于，使用如权利要求3所述试剂盒，包括以下步骤：

(1)取体外获能液和体外受精液分别做获能液滴和受精液滴，并分别用矿物油覆盖液滴，平衡后备用；

(2)取精子放入平衡后的获能液滴中培养获能；

(3)取卵子放入平衡后的受精液滴中，然后取步骤(2)获能后的精子放入受精液滴中，培养受精。

8.如权利要求7所述的哺乳动物体外受精方法，其特征在于，所述获能液滴为250～350μL/滴，受精液滴为150～250μL/滴，平衡至少30min。

9.如权利要求7所述的哺乳动物体外受精方法，其特征在于，所述哺乳动物为长爪沙鼠，精子获能时间为4～5h。

10.如权利要求9所述的哺乳动物体外受精方法，其特征在于，取卵子的方法包括以下步骤：

(1)每只长爪沙鼠雌鼠使用40～60IU孕马血清促性腺激素和40～80IU绒毛膜促性腺激素先后进行超排，两者间隔96～100h；

(2)绒毛膜促性腺激素注射15～18h后处死雌鼠，取出输卵管内的卵丘团放入平衡后的受精液滴中。