[发明专利]一种精子体外获能液、用于体外受精的试剂盒及哺乳动物体外受精方法

说明书

本发明公开了一种精子体外获能液、用于体外受精的试剂盒及哺乳动物体外受精方法。一种精子体外获能液，包括NaCl 110～140mmol、KCl 2.40～2.95mmol、NaHCO₃ 22.5～27.5mmol、葡萄糖4.8～6.0mmol、丙酮酸钠0.22～0.30mmol、牛磺酸0.22～0.30mmol、肾上腺素0.04～0.06mmol、BSA 14～16mg/ml、MgCl₂ 0.4～0.6mmol、CaCl₂ 1.6～2.0mmol、DL‑乳酸钠溶液8～12mmol，pH值为7.35±0.10。本发明精子体外获能液能够显著提高长爪沙鼠在体外受精效率，使用本发明方法后长爪沙鼠在体外受精效率大大提高，2细胞发育率达到65％以上，最高可以达到85％，取得了与显微注射方法相当甚至更高的体外受精率，使用方便，具有很好的应用前景。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种精子体外获能液、用于体外受精的试剂盒及 哺乳动物体外受精方法。

背景技术

长爪沙鼠(Mongolian gerbil，Meriones unguiculatus)是研究神经学、寄生虫学、病毒学、 细菌学、内分泌学、遗传学、血液学、脂类、糖代谢、肿瘤学、药理学、放射生物学、生殖 和毒理学的良好模型动物，具有很高的科研价值和应用前景。采用传统的保种方法，消耗大 量人力物力资源，而且自然灾害、意外微生物污染都可能使这些宝贵品系毁于一旦，特殊的 表型在繁育过程中也可能由于遗传漂变而丧失，因此对其胚胎进行冷冻保存是未来沙鼠资源 保种的主要方式，这就需要有大量的胚胎，体外受精正是获得大量胚胎的有效途径。因为长 爪沙鼠精子与胚胎体外培养的特殊性，相关研究一直进展缓慢,迄今为止，仍未找到适合于长 爪沙鼠精子体外获能、体外受精和胚胎体外发育的培养液。

目前长爪沙鼠胚胎来源主要是超排后体内受精，体外受精技术国内未见报道。Mochida K 等(Mochida K,Matsuda J,Ponce RH,et al.In vitro fertilization andintracytoplasmic sperm injection in the mongolian gerbil(Merionesunguiculatus)[J].BIOCELL,2004,28(2):189.)比较 沙鼠的体外受精和显微注射的效果，其体外受精率11％，后来选择显微注射，提高为63％， 但是显微注射需要昂贵的仪器。Naoko Kimura等(Kimura N,Sasaki M,Totsukawa K. Development of Mongolian gerbilembryos in chemically defined medium[J].Bull Yamagiwa Univ Agric Sci,2005,14(4):195-200.)沙鼠体外受精率最高为29.8％，

发明内容

本发明针对现有技术中长爪沙鼠体外受精效率低，而显微注射需要昂贵的仪器的问题， 提供了一种精子体外获能液、用于体外受精的试剂盒及哺乳动物体外受精方法，提高体外受 精效率。

一种精子体外获能液，包括NaCl 110～140mmol、KCl 2.40～2.95mmol、NaHCO₃22.5～27.5mmol、葡萄糖4.8～6.0mmol、丙酮酸钠0.22～0.30mmol、牛磺酸0.22～0.30mmol、肾 上腺素0.04～0.06mmol、BSA 14～16mg/ml、MgCl₂ 0.4～0.6mmol、CaCl₂ 1.6～2.0mmol、DL-乳 酸钠溶液8～12mmol，pH值为7.35±0.10。