[发明专利]一种低分子量羊栖菜多糖的制备方法

说明书

本发明提供了一种低分子量羊栖菜多糖的制备方法，是将羊栖菜洗净、粉碎、过筛、回流脱脂、冷水浸提、醇沉、冷冻干燥、D101型大孔树脂脱色，再用三氟乙酸(TFA)水解即可获得分子量均一，纯度较高的低分子量羊栖菜多糖；本发明的反应条件温和，获取的低分子量多糖回收率较高；降解试剂容易从反应液中直接清除，产物分离纯化方便，并且操作简单适合工业化生产。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种低分子量羊栖菜多糖的制备方法。

背景技术

羊栖菜多糖(Sargassum fusiforme polysaccharide)是一类含岩藻糖的硫酸多糖，具有抗肿瘤、抗病毒、抗凝血、降血脂、降血糖等生物活性，因此具有很高的药用价值。然而羊栖菜多糖分子量分布范围较广，可从几千到上百万道尔顿，由于分子量大、分子体积大、水溶性差、构效关系不明确等缺点，极大地限制了羊栖菜多糖作为药物的开发。

目前已知的多糖降解方法有化学法、物理法和酶解法等。近年来对于海藻来源的多糖降解已有许多研究，而对于羊栖菜多糖降解方面的研究尚未见有系统的文献报道。因此，研究羊栖菜多糖的降解方法，以及对多糖降解产物的分子量与生物活性之间关系的探究，为筛选低分子量羊栖菜多糖，开发新产品，发展羊栖菜产业等具有十分重要的意义。同时也可以为羊栖菜多糖的构效关系研究提供借鉴。

发明内容

本发明是针对现有技术的不足，为羊栖菜多糖的降解提供一种操作步骤简单，耗能耗材少的方法，并获得糖含量及纯度较高、分子量均一的寡糖产品。为低分子量羊栖菜多糖及寡糖的研究和开发提供一条新途径。

本发明的一种低分子量羊栖菜多糖的制备方法，包括以下步骤：

(1)将洗净烘干的羊栖菜粉碎，过40目药筛；

(2)将步骤(1)中得到的羊栖菜藻粉与95％的乙醇充分混合，羊栖菜藻粉∶95％乙醇＝1∶5～15(m∶v)，80℃回流脱脂，时间3h/次，至少重复三次；

(3)将步骤(2)中得到的脱脂后的羊栖菜藻粉按照料液比为1∶20(m∶v)加入蒸馏水浸提，时间8h/次，至少重复三次；

(4)将步骤(3)中得到的浸提液于50℃下减压浓缩至原体积的2％，加入4mol/L氯化钙至不再产生沉淀后4500r/min离心10min；

(5)将步骤(4)中得到的上清液于50℃下减压浓缩至在烧瓶内开始挂壁后缓慢加入95％乙醇至乙醇浓度为80％，醇沉过液，醇沉获得的沉淀便是羊栖菜多糖；

(6)将步骤(5)醇沉后得到的沉淀，复溶于水，进行减压冷冻干燥；

(7)脱色处理：利用D101型大孔树脂作为层析柱(500mL)的填料，将羊栖菜多糖配制成5％的溶液，每次上样10mL，用0.5～2mol/L的氯化钠洗脱脱色；

(8)低分子量羊栖菜多糖的制备：以脱色后羊栖菜多糖为原料，将多糖用0.5mol/L三氟乙酸(TFA)溶液配制成5mg/mL的终浓度，65℃水浴反应4～6h，反应结束立刻减压清除多余的三氟乙酸，并将多糖溶液放入截留量为1k Da透析袋中，流水透析，除去杂质后，便获得低分子量羊栖菜多糖溶液。

上述方法中，所述的脱色处理是利用D101型号的大孔树脂作为层析柱(500mL)的填料，将羊栖菜多糖配成5％，每次上样10mL，收集回收0.5～2mol/L氯化钠洗脱的组分，并用超滤系统除去收集液里的盐分及杂质。

上述方法中，所述的羊栖菜多糖溶液降解试剂为三氟乙酸(TFA)，并且是以0.5mol/L三氟乙酸将多糖配制成5mg/mL的最终浓度。

上述方法中，所述水浴密闭条件，是将多糖溶液密封于50mL玻璃管内在65℃水浴反应4～6小时。