[发明专利]一种甲氨蝶呤前药及其双靶向纳米粒子的制备方法

说明书

本发明公开了一种甲氨蝶呤前药及其双靶向纳米粒子的制备方法，将透明质酸溶于第一有机溶剂，十八胺溶于第二有机溶剂，在有活化剂存在的情况下混合反应得到透明质酸‑十八胺结合物；透明质酸‑十八胺结合物溶于第三有机溶剂，再将溶于第三有机溶剂的活化的甲氨蝶呤加入其中，反应得到甲氨蝶呤‑透明质酸‑十八胺结合物，即为甲氨蝶呤前药。然后将甲氨蝶呤前药加入去离子水中，冰浴中超声自组装成甲氨蝶呤前药双靶向纳米粒子，为粒径60～120nm的球形，在水中稳定性好，甲氨蝶呤既起治疗作用又起靶向作用，透明质酸起着靶向配体的作用，使得该甲氨蝶呤前药双靶向纳米粒子具有靶向和协同治疗的效果，具有广泛的应用前景。

技术领域

本发明属于医药类抗肿瘤及抗风湿药物制剂领域，具体涉及一种甲氨蝶呤前药及其双靶向纳米粒子的制备方法。

背景技术

甲氨蝶呤(MTX)是一种叶酸类抗代谢药剂，能与肿瘤细胞表面的叶酸受体结合，起到很好的靶向作用，常用于各种恶性肿瘤治疗，也是常用的抗风湿药物。MTX在药用上也有许多不利之处，其可增加肝肾功能毒性，且由于药物作用机理是作用在肿瘤细胞的细胞质而非细胞核，通过对二氢叶酸还原酶的抑制而达到阻碍肿瘤细胞DNA合成的目的，所以对正常的生物细胞也有药物作用，毒副作用加大。

透明质酸(HA)是一种天然的生物大分子物质，广泛存在于关节滑液和细胞间质中，具有良好的生物相容性、可生物降解、无毒、无免疫原性、化学修饰多样性等优点，并且，透明质酸受体在多种肿瘤细胞高度表达，利用配体-受体相互作用，透明质酸可以靶向肿瘤细胞过度表达的CD44受体，提高肿瘤治疗效果，因此被广泛用于抗癌药物的传递。天然HA在机体内很容易降解，作为药品或生物材料在体内的存留时间较短，阻碍了它在新型生物材料方面的开发和应用。对HA进行化学修饰后，不仅提高了HA抗透明质酸酶降解的能力，还赋予了HA其他特别的性质，扩大了HA的应用领域。

纳米粒子作为药物载体进入体内，可以有效地减少人体网状内皮系统(RES)巨噬细胞的吞噬，作为纳米级的粒子能穿越细胞间隙，可通过人体最小的毛细血管及血脑屏障(BBB)，并被细胞组织吸收，纳米粒子药物载体可以控制药物在靶向部位释放、减少药物用量、增强药物疗效并降低药物毒性。同时，粒子系统可以避免药物活性丧失，有利于药物的储藏和运输。纳米粒子的诸多优点，使其成为一种很有前途的药物新剂型。

甲氨蝶呤和透明质酸的靶向性都有一定的限度，将二者一起作用势必会增加载体靶向性，但目前还没有将二者结合制备双靶向制剂或制备纳米粒子药物载体的报道。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，提供了一种甲氨蝶呤前药及其双靶向纳米粒子的制备方法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案之一是：

一种甲氨蝶呤前药的制备方法，包括：

1)将透明质酸(HA)溶于第一有机溶剂中，20～40℃下加热至透明质酸溶解后冷却到室温，再加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，搅拌反应至少1h；将十八胺(OCA)溶于第二有机溶剂后，加入至上述溶液中；所述十八胺与透明质酸单体的摩尔比为5:1～1:1；所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺与透明质酸单体的摩尔比、N-羟基琥珀酰亚胺与透明质酸单体的摩尔比均为8:1～1:1；然后在隔绝氧气的条件下，55～65℃搅拌至少5h，再在室温下搅拌22～26h；得到的混合溶液用体积比1:3～1:1的水-乙醇混合液透析45～50h，再用水透析45～50h，过滤，冷冻干燥，得到透明质酸-十八胺结合物(HA-OCA)；