[发明专利]利用筑波链霉菌提高他克莫司发酵产量的方法在审
| 申请号： | 201810084261.4 | 申请日： | 2018-01-29 |
| 公开（公告）号： | CN108192908A | 公开（公告）日： | 2018-06-22 |
| 发明（设计）人： | 闻建平;马东旭;崔佳琦 | 申请（专利权）人： | 天津大学 |
| 主分类号： | C12N15/76 | 分类号： | C12N15/76;C12P17/18;C12R1/465 |
| 代理公司： | 天津市北洋有限责任专利代理事务所 12201 | 代理人： | 王丽 |
| 地址： | 300350 天津市津南区海*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 发酵 基因工程菌 筑波链霉菌 基因工程手段 调控基因 他克莫司 靶基因 菌株 策略构建 出发菌株 应用潜力 表达量 基因组 高产 改造 | ||
【权利要求书】：
1.一种利用筑波链霉菌提高他克莫司发酵产量的方法；具体步骤如下：
1)根据tsuZ和tsuS2已知序列设计PCR引物，以S.tsukubaensis NRRL18488基因组DNA为模板，扩增正调控因子tsuZ基因以及其靶基因tsuS2；
2)将正调控基因tsuZ与靶基因tsuS2通过融合PCR串联成一个大片段，将所得大片段整合到表达载体pIB139中，得到重组表达载体pOtsuZS2；
3)将2)中构建好的重组表达载体pOtsuZS2，利用接合转移方法整合到S.tsukubaensisNRRL18488基因组上，构建成基因工程菌；
4)培养3)中所构建的基因工程菌株，发酵生产FK506。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于tsuZ基因为多效性SARP家族转录调控因子，核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于靶基因tsuS2编码γ-丁酮内酯合酶，核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。
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