[发明专利]评估水中污染物的神经性毒性的方法在审
| 申请号： | 201810084597.0 | 申请日： | 2018-01-29 |
| 公开（公告）号： | CN108251508A | 公开（公告）日： | 2018-07-06 |
| 发明（设计）人： | 任宗明;潘宏伟;任佰祥;乔琳琳;李尚戈;杨美怡 | 申请（专利权）人： | 山东师范大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6851 | 分类号： | C12Q1/6851 |
| 代理公司： | 济南圣达知识产权代理有限公司 37221 | 代理人： | 郑平 |
| 地址： | 250014 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 水中 污染物 斑马鱼 空白组 实验组 地表水 评估 实时荧光定量PCR 溴氰菊酯溶液 毒蕈碱受体 污染物溶液 提取总RNA 定量分析 实验数据 反转录 扩增 脑部 曝气 配制 解剖 绘制 暴露 | ||
1.一种利用斑马鱼对水中污染物的神经性毒性的潜在风险进行评估的方法，其特征在于，包括：
配制10％地表水浓度的溴氰菊酯溶液；
选取适量的斑马鱼分别在曝气水和10％地表水浓度的某污染物溶液中进行为期七天的连续暴露，分别即为空白组和实验组；
对上述空白组和实验组的斑马鱼脑部进行解剖，提取总RNA、反转录成cDNA，并进行实时荧光定量PCR扩增；
用2－△△CT法对对实验数据进行相对定量分析，并绘制折线图，根据实验结果评估水中污染物可能对毒蕈碱受体(M1受体)的功能的影响。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述溴氰菊酯溶液的配制方法为：将0.02g溴氰菊酯溶于5mLDMSO中，加入995mL去离子水，配置成1L母液(0.02g/L)；取100μL母液于锥形瓶中，用去离子水定容到1L，配成1L的浓度为0.002mg/L的实验用溶液。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述DMSO在水中的浓度小于0.5％。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述解剖处理的具体步骤为：取斑马鱼，放入1.5mL EP管中，进行窒息处理；在无菌操作条件下对斑马鱼的脑部进行解剖。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述斑马鱼的试验条件为：温度22±2℃；光周期:16h光照，04:00-20:00，光照强度4000lx；8h黑暗，20:00-04:00；每天8:30和16:30各喂食一次。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述斑马鱼的躯干长3cm，尾长2cm。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增采用两步法，具体扩增条件如表1所示。
8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述提取总RNA的试剂盒为动物组织总RNA提取试剂盒DP431。
9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述反转录成cDNA的试剂盒的型号为KR106FastQuant RT Kit。
10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述实时荧光定量PCR的试剂为SuperRealPreMix Plus(SYBR Green)(FP205)。
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