[发明专利]一种基于穿膜肽的三元基因递送系统及其应用有效
| 申请号： | 201810089681.1 | 申请日： | 2018-01-30 |
| 公开（公告）号： | CN108404136B | 公开（公告）日： | 2019-12-03 |
| 发明（设计）人： | 冯亚凯;郝雪芳;李茜;郭锦棠;任相魁 | 申请（专利权）人： | 天津大学 |
| 主分类号： | A61K47/42 | 分类号： | A61K47/42;A61K47/34;A61K47/64;A61K47/60;A61K47/59;A61K48/00 |
| 代理公司： | 12201 天津市北洋有限责任专利代理事务所 | 代理人： | 陆艺<国际申请>=<国际公布>=<进入国 |
| 地址： | 300350 天津市津南区海*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 递送系统 三元基因 穿膜肽 负电 基因递送系统 星形聚合物 静电 组氨酸 氨基 细胞核 细胞 核定位信号 多肽序列 活性位点 基因递送 聚乙二醇 携带基因 靶向性 活性酯 硫吡啶 内涵体 有效地 正电荷 多肽 富含 应用 基因 | ||
1.一种基于穿膜肽的三元基因递送系统的制备方法，其特征是包括如下步骤：
(1)按摩尔比为1：8-16的比例，将八氨基POSS和NHS-PEG-OPSS溶解于pH＝7.4的PBS缓冲溶液中，室温反应2-3小时；
所述八氨基POSS为八氨基笼状聚倍半硅氧烷的简称；所述NHS-PEG-OPSS为邻二硫吡啶聚乙二醇活性酯的简称；
(2)将REDV-G-TAT-G-NLS-C加入到步骤(1)获得的溶液中，反应4-8小时，采用截留分子量为3500的透析袋透析提纯，冻干，得到POSS-(PEG-NLS-G-TAT-G-REDV)8聚合物；
所述八氨基POSS和REDV-G-TAT-G-NLS-C的摩尔比为1:8-16；
所述REDV-G-TAT-G-NLS-C的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；
(3)以pH＝7.4的PBS缓冲溶液为溶剂，配制浓度为0.5-2毫克/毫升的POSS-(PEG-NLS-G-TAT-G-REDV)8聚合物液体；按POSS-(PEG-NLS-G-TAT-G-REDV)8聚合物与ZNF580基因或Cy5标记的寡核苷酸的质量比为1：0.6-0.8的比例，将浓度为0.05-0.2毫克/毫升的ZNF580基因水溶液，或浓度为0.05-0.2毫克/毫升的Cy5标记的寡核苷酸水溶液，在搅拌下，滴加到所述聚合物液体中，搅拌1-2小时,得到二元基因递送系统；
(4)将TP-H12多肽溶解于pH＝7.4的PBS缓冲溶液中，配成0.2-0.6毫克/毫升，在搅拌下，滴加到所述二元基因递送系统中，得到基于穿膜肽的三元基因递送系统；
所述二元基因递送系统中ZNF580基因或Cy5标记的寡核苷酸与TP-H12的质量比为1:3-5；
所述TP-H12多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
2.权利要求1的方法制备的基于穿膜肽的三元基因递送系统。
3.权利要求2的基于穿膜肽的三元基因递送系统在制备基因递送药物中的应用。
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