[发明专利]一种CIK细胞快速扩增的方法及试剂盒

权利要求书

1.一种CIK细胞快速扩增的方法，包括分离外周血单个核细胞的步骤，其特征在于，所述方法还包括以下步骤：

①活化培养瓶：向培养瓶中加入活化剂至覆盖瓶底，孵育，得活化培养瓶，所述活化剂由CD3单克隆抗体和IFN-γ溶于PBS缓冲溶液配制而成；

②配制活化培养基：向49mL含血浆的基础培养基中加入1mL的CIK细胞激活剂，得活化培养基，所述CIK细胞激活剂由IL-2、IL-1α和IFN-γ溶于PBS缓冲溶液配制而成；

③接种单个核细胞：以活化培养基重悬单个核细胞，接种于活化培养瓶，37℃、5％CO₂培养箱中培养48-96h，得CIK细胞；

④扩增CIK细胞：弃活化培养基，加入扩增培养基，37℃、5％CO₂培养箱中培养至所需数量，所述扩增培养基为含有IL-2、抗坏血酸、维生素E、人血浆白蛋白和胰岛素的基础培养基；

所述步骤①的活化剂中CD3单克隆抗体浓度为30-100μg/mL，IFN-γ浓度为1000-3000U/mL；所述步骤②的CIK细胞激活剂中IL-2浓度为20000-100000U/mL，IL-1α浓度为20000-100000U/mL，IFN-γ的浓度为50000-150000U/mL；所述步骤④的扩增培养基中IL-2浓度为500-1000U/L、抗坏血酸浓度为100-400mg/L、维生素E浓度为300-800mg/L、人血浆白蛋白浓度为3-8g/L、胰岛素浓度为5-20ng/L。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤①的活化剂中CD3单克隆抗体浓度为50μg/mL，IFN-γ浓度为2000U/mL；所述步骤②的CIK细胞激活剂中IL-2浓度为50000U/mL，IL-1α浓度为50000U/mL，IFN-γ的浓度为100000U/mL；所述步骤④的扩增培养基中IL-2浓度为700U/L、抗坏血酸浓度为200mg/L、维生素E浓度为500mg/L、人血浆白蛋白浓度为5g/L、胰岛素浓度为10ng/L。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述基础培养基为RPMI-1640基础培养基；所述步骤③中血浆为灭活自体血浆，血浆含量为活化培养基体积的10％。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤①中孵化条件为4℃～37℃，孵育时间为1-18h。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤④扩增CIK细胞时，扩增培养基每隔1-3天更换一次。

6.一种CIK细胞快速扩增的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括活化剂、CIK细胞激活剂和CIK细胞增殖剂，所述活化剂由CD3单克隆抗体和IFN-γ溶于PBS缓冲溶液配制而成；CIK细胞激活剂由IL-2、IL-1α和IFN-γ溶于PBS缓冲溶液配制而成；CIK细胞增殖剂由IL-2、抗坏血酸、维生素E、人血浆白蛋白和胰岛素组成。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述活化剂中CD3单克隆抗体浓度为30-100μg/mL，IFN-γ浓度为1000-3000U/mL；CIK细胞激活剂中IL-2浓度为20000-100000U/mL，IL-1α浓度为20000-100000U/mL，IFN-γ的浓度为50000-150000U/mL，使用时稀释50倍；CIK细胞增殖剂中IL-2含量为500-1000U、抗坏血酸含量为100-400mg、维生素E含量为300-800mg、人血浆白蛋白含量为3-8g和胰岛素含量为5-20ng，使用时以基础培养基稀释至1000mL。