[发明专利]一种刺激诱导单个核细胞扩增为γδT细胞的组合物及其应用有效
| 申请号： | 201810091598.8 | 申请日： | 2018-01-30 |
| 公开（公告）号： | CN108220239B | 公开（公告）日： | 2019-11-19 |
| 发明（设计）人： | 赵报;刘丹;吴疆;邓蒙蒙;程箫 | 申请（专利权）人： | 安徽瑞达健康产业有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0783 | 分类号： | C12N5/0783 |
| 代理公司： | 34120 合肥顺超知识产权代理事务所(特殊普通合伙) | 代理人： | 黄晶晶<国际申请>=<国际公布>=<进入 |
| 地址： | 230088 安徽省合肥市高新区*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 扩增 诱导 单个核细胞 活化 刺激 外周血单个核细胞 临床应用 体外诱导 细胞毒性 组合物体 唑来膦酸 磷酸 增殖 应用 | ||
1.一种刺激诱导单个核细胞扩增为γδT细胞的组合物，其特征在于，该组合物包括唑唻磷酸、抗人CD3 Ab、抗人CD28 Ab、IL-15、IL-21和IL-2；唑唻磷酸的浓度为1-100μM、抗人CD3 Ab的浓度为10～500ng/mL、抗人CD28 Ab的浓度为10～500ng/mL、IL-15的浓度为10～200ng/mL、IL-21的浓度为10～200ng/mL、IL-2的浓度为500～3000U/mL。
2.根据权利要求1所述的刺激诱导单个核细胞扩增为γδT细胞的组合物，其特征在于：唑唻磷酸浓度为5μM、抗人CD3 Ab浓度为50ng/mL、抗人CD28Ab浓度为50ng/mL、IL-15浓度为50ng/mL、IL-21浓度为50ng/mL、IL-2浓度为1000U/mL。
3.根据权利要求1所述的刺激诱导单个核细胞扩增为γδT细胞的组合物，其特征在于：所述单个核细胞来源于外周血、脐带血、骨髓或诱导性多能干细胞。
4.一种使用权利要求1-3任一项所述的组合物刺激诱导单个核细胞体外扩增为γδT细胞的方法，包括以下步骤：
1)单个核细胞的制备：分离单个核细胞，用体积百分比50％-100％的含10vt％FBS或自体血清的RMPI 1640和0％-50％X-vivo15的混合培养基重悬细胞，接种在培养瓶或培养袋中培养；
2)γδT细胞的诱导：加入含浓度为1-100μM的唑唻磷酸和500～3000U/mL IL-2的混合培养基体外刺激4天后加入含有10～500ng/mL抗人CD3 Ab、10～500ng/mL抗人CD28Ab、10～200ng/mL IL-15、10～200ng/mL IL-21、和500～3000U/mL IL-2的混合培养基进行半量换液，置于37℃、5％CO2培养箱中培养；
3)每2～3天根据计数结果补液，14～21天收获γδT细胞。
5.根据权利要求4所述的组合物刺激诱导单个核细胞体外扩增为γδT细胞的方法，其特征在于：步骤2)中加入的唑唻磷酸终浓度为5μM、抗人CD3 Ab终浓度为50ng/mL、抗人CD28Ab终浓度为50ng/mL、IL-15终浓度为50ng/mL、IL-21终浓度为50ng/mL和IL-2终浓度为1000U/mL。
6.根据权利要求4所述的组合物刺激诱导单个核细胞体外扩增为γδT细胞的方法，其特征在于：所述的外周血单个核细胞(PBMCs)的浓度为1×106/mL。
7.根据权利要求4所述的组合物刺激诱导单个核细胞体外扩增为γδT细胞的方法，其特征在于：混合培养基中含10vt％FBS或自体血清的RMPI 1640的比例为50vt％，X-vivo15培养基的比例为50vt％。
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