[发明专利]一种刺激诱导单个核细胞扩增为γδT细胞的组合物及其应用

说明书

本发明涉及一种刺激诱导单个核细胞扩增为γδT细胞的组合物，该组合物包括唑唻磷酸、anti‑human CD3Ab、anti‑human CD28Ab、IL‑15、IL‑21和IL‑2，本发明还提供了一种利用该组合物体外大量扩增γδT细胞的方法，具体为一种用外周血单个核细胞(PBMCs)在体外诱导大量扩增为γδT细胞的方法，本发明通过加入唑来膦酸诱导活化，加入anti‑human CD3Ab,anti‑human CD28Ab,IL‑15，IL‑21，和IL‑2进行诱导活化增殖，利用多种扩增因子组合共同刺激诱导扩增γδT细胞，获得的γδT细胞具有数量大、纯度高、细胞毒性强等特点，具有非常好的临床应用价值。

技术领域

本发明涉及一种可刺激单个核细胞使其诱导扩增为γδT细胞的组合物，及使用该组合物对单个核细胞(PBMCs)在体外大量扩增γδT 细胞的方法。

背景技术

肿瘤是目前对人类健康造成威胁的重大疾病之一，无论死亡率和发病率均居高位。肿瘤免疫疗法是继手术、放疗、化疗之后的第四种肿瘤治疗方法，也是目前最受关注和治疗效果最好的疗法。粘膜(表皮)组织作为物理屏障含有广泛的细胞类型包括非淋巴系和淋巴系免疫细胞，特别是T细胞。

研究已经证明T细胞，特别是表达γδ受体的T细胞在维持粘膜组织平衡和阻止病原微生物感染和恶性癌变等表皮组织压力中发挥关键作用。γδT细胞主要在胸腺中发育成熟，通过V(D)J基因重组产生γδT细胞受体(TCR)。通过特异性的基因重排，从一个共同淋巴细胞前体(common lymphoidprecursor,CLP)分化为表达αβ受体和γδ受体的T细胞系。γδT细胞通过关联CD3复合物传导TCR信号，在健康成年人的外周血中，γδT细胞只占循环T细胞的1-10％；αβT 细胞占循环T细胞的90％以上，并且通过关联CD3复合物直接传导胞内信号。与αβTCR不同，γδTCR可以直接结合抗原且不依赖MHC 分子介导的抗原呈递，因此在γδT细胞表面不表达CD4和CD8分子。广泛的研究表明，根据δ链的表达情况，γδT细胞可以分为三大类，表达Vδ1链的γδT细胞主要分布在粘膜表面的内皮层，很少一部分分布在外周血中。Vδ1型γδT细胞在抵抗损伤、感染和恶性转化表皮完整性中发挥重要作用。γδT细胞另一类主要的亚群是表达Vδ2链的γδT细胞，而且Vδ2链几乎只与Vγ9链配对，是健康成年人中主要的循环γδT细胞，可以达到外周血循环γδT细胞的50-90％。有趣的是，一旦被激活，Vδ2T细胞获得专职抗原呈递细胞(APCs)的特性,包括表达共刺激分子、粘附分子、和抗原呈递分子(例如，CD80, CD86,CD11b,CD18,CD54和MHCⅡ)。第三类γδT细胞亚群表达Vδ3 链,约占循环T细胞的0.2％，包括CD4+,CD8+和CD4-CD8-亚群。 Vδ3γδT细胞不稳定表达CD56、CD161、HLA-DR和NKG2D。