[发明专利]抗黄嘌呤氧化酶的单克隆抗体及其制备方法和用途

权利要求书

1.一株分泌抗黄嘌呤氧化酶的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分类命名为：杂交瘤细胞株CPU-LTMX1，于2017年6月14日保藏于中国武汉市武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO.C201788。

2.由权利要求1所述的杂交瘤细胞株分泌的抗黄嘌呤氧化酶的单克隆抗体mAb，命名为CPUKO1。

3.权利要求2所述的单克隆抗体CPUKO1的制备技术中免疫脾脏淋巴细胞的获得方法：是用黄嘌呤氧化酶的B细胞表位O(氨基酸序列见SEQ ID NO.3)与分子内载体肽(含SEQ IDNO.1和SEQ ID NO.2，2个肽连接方法多样)偶联来制备小分子抗原肽或肽免疫原O-IA2(5)-P2-1(氨基酸序列见SEQ ID NO.4)并通过合成快速方便获得，小分子抗原肽不需偶联BSA或KLH，可直接作为免疫原免疫小鼠能产生强免疫应答，免疫动物可用于制备免疫脾脏淋巴细胞，此免疫脾脏淋巴细胞可用于制备杂交瘤细胞来制备单克隆抗体或提取免疫脾脏淋巴细胞基因通过常用抗体库或基因工程来制备多种抗体，抗原肽可用于筛选杂交瘤细胞克隆。

4.根据权利要求3获得的免疫脾脏淋巴细胞通过杂交瘤技术制备杂交瘤细胞株CPU-LTMX1，再制备抗黄嘌呤氧化酶的单克隆抗体CPUKO1，此抗体为Th2型抗体，在小鼠为IgG1亚型，能特异性识别结合及抑制黄嘌呤氧化酶，能降血糖、尿酸、肌酐，调节氧化应激，调节免疫平衡由Th1趋向Th2，降低Th17，升高Treg，减轻肾脏炎症。

5.根据权利要求2和4所述的单克隆抗体的应用，所述单克隆抗体可以开发作为黄嘌呤氧化酶的检测试剂。

6.根据权利要求2和4所述的单克隆抗体的应用，所述单克隆抗体可制备药学上可接受的药物用于防治高尿酸症和糖尿病及并发症，防治Th1/Th2免疫平衡异常、Th17异常，Treg异常、黄嘌呤氧化酶和尿酸及肌酐异常和氧化应激紊乱引起的肾炎，痛风、肝病、动脉粥样硬化、糖尿病及并发症、老年痴呆，眼病，心血管等疾病。

7.根据权利要求1-4获得的杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体CPUKO1的重链可变区V_H序列(氨基酸序列见SEQ ID NO.5，核苷酸序列见SEQ ID NO.13)和轻链可变区V_L序列(氨基酸序列见SEQ ID NO.6，核苷酸序列见SEQ ID NO.14)，V_H的3个CDR区的序列(氨基酸序列分别见SEQ ID NO.7，SEQ ID NO.8，SEQ ID NO.9)和核苷酸序列(核苷酸序列分别见SEQ IDNO.15，SEQ ID NO.16，SEQ ID NO.17)，V_L的3个CDR区的序列(氨基酸序列分别见SEQ IDNO.10，SEQ ID NO.11，SEQ ID NO.12)和核苷酸序列(核苷酸序列分别见SEQ ID NO.18，SEQID NO.19，SEQ ID NO.20)。

8.根据权利要求7的氨基酸序列或核苷酸序列获得重组微生物和转基因动物或植物及其细胞来作为生产工厂生产抗体或用于改造。

9.根据权利要求7和8的用途，制备免疫原和制备免疫脾脏淋巴细胞来制备抗体，用于开发各种药学上可以接受的药物或组合物或偶联物或聚合物。

10.根据上述权利要求，制备肽免疫原，再制备免疫脾脏淋巴细胞，再制备特异性单克隆抗体或特异抗体在治疗代谢性疾病中的开创性理论思路及实际应用。