[发明专利]抗黄嘌呤氧化酶的单克隆抗体及其制备方法和用途

说明书

本发明涉及免疫学、药学及医学相关领域，公开了基于黄嘌呤氧化酶(XOD)的B细胞表位制备杂交瘤细胞株和单克隆抗体的方法和用途，特别涉及用分子内载体肽来偶联XOD的B表位来制备小分子抗原肽并通过合成快速获得，其免疫小鼠能产生强免疫应答，可用于制备免疫脾脏淋巴细胞，再制备杂交瘤细胞和抗体等，本发明单克隆抗体由杂交瘤细胞株(保藏编号为CCTCC No.C201788)分泌，为Th2型抗体，在小鼠为IgG1亚型，能抑制XOD活性，特异结合XOD，可开发XOD检测试剂及XOD抑制剂，能降血糖和尿酸及肌酐、调节氧化应激和免疫平衡由Th1趋向Th2，减轻肾脏炎症，可制备药物用于防治由于尿酸或氧化应激紊乱引起的高尿酸、痛风、肾肝病、糖尿病及并发症、AS、心血管疾病及Th1偏高相关疾病。

技术领域

本发明涉及免疫学、药学及医学相关领域。本发明涉及抗黄嘌呤氧化酶 的单克隆抗体及其制备方法和用途，特别涉及用人黄嘌呤氧化酶的B细胞表位 作为半抗原，还特别涉及通过用一个小分子的分子内载体肽来偶联人黄嘌呤氧 化酶(XOD)的B细胞表位肽来制备多表位肽或抗原肽或肽免疫原并通过合成快 速获得，肽免疫原免疫小鼠能产生强免疫应答，可用于制备免疫脾脏淋巴细胞， 此免疫脾脏淋巴细胞可用于制备杂交瘤细胞制备单克隆抗体或通过已有技术提 取其基因通过抗体库技术或基因工程来制备多种抗体。制备的单克隆抗体特异 结合和抑制黄嘌呤氧化酶活性，可开发XOD检测试剂及XOD抑制剂，所述单 克隆抗体属于Th2亚型抗体(Th2亚型抗体在小鼠为IgG1亚型抗体，在人为IgG2a 亚型抗体)，此单克隆抗体能抑制XOD活性，特异的和XOD及含此B细胞表位的 肽或蛋白结合，可以开发XOD检测试剂及XOD抑制剂，所述单克隆抗体为Th2 型抗体，能特异性识别结合及抑制黄嘌呤氧化酶，能降体内血糖、尿酸和肌酐， 调节氧化应激，调节免疫平衡由Th1趋向Th2，降低Th17，升高Treg，减轻肾 脏炎症，保护肾脏，可制备药物用于防治由于黄嘌呤氧化酶异常、尿酸异常、氧 化应激紊乱引起的痛风、肾肝病、糖尿病及并发症、AS、心血管疾病及Th1免 疫调节偏高相关疾病，具有重要应用价值。

背景技术

近年来，随着人们生活水平的提高以及饮食结构的改善，国内外痛风的 患病率呈现上升趋势，并且有年轻化的走向，根据美国健康与营养调查报道， 在痛风的发病率上，男性比女性有更高的风险，男女患病比例在7∶1-9∶1之间。 随着年龄的增大性别比有持平的趋势。痛风的临床症状表现为急性发作性关节 炎、痛风石形成、痛风性慢性关节炎、尿酸盐肾病和尿酸性尿路结石，重者可 能出现关节残疾和肾功能不全。这是由于长期嘌呤代谢紊乱，致使尿酸产生过 多或尿酸排泄过少而引起的一组疾病。高尿酸血症是痛风的生化基础。随着人 们对高尿酸血症的关注增加，越来越多的研究表明，高尿酸血症已经不是一个单纯的尿酸含量超标的病症，它与多种心脑血管疾病紧密相关，除此之外，高 尿酸血症与代谢综合征的关系也密不可分。研究表明，高尿酸血症的发病原因 多数是由于黄嘌呤氧化酶的异常，从而造成尿酸在体内的大量积累、沉积。抑 制黄嘌呤氧化酶的活性可有效地减少尿酸的生成，同时缓解高尿酸血症及通风 的发病情况。

黄嘌呤氧化酶(XOD)是核苷酸的分解代谢酶，能催化次黄嘌呤氧化为 黄嘌呤再氧化为尿酸。黄嘌呤氧化酶由1330个氨基酸构成，其氨基酸序列在鼠 和人之间具有90％的同源性，它是由两个完全对称的结构单元构成。每一个结 构单元为145ku，其催化中心包括一个钼蝶呤中心、两个铁-硫中心和一个黄素 腺嘌呤二核苷酸，其中钼蝶呤中心是黄嘌呤氧化酶催化黄嘌呤生成尿酸的关键 位点。XOD以分子氧为电子受体，通过级联反应生成大量活性氧，引起一系列 的有害反应，包括细胞凋亡、内皮功能障碍、心脏机械能量解耦联、炎症、硬 化、癌症和衰老等病理过程。尿酸是嘌呤在体内代谢的终产物，人类和灵长类 动物的嘌呤代谢途径中缺乏尿酸氧化酶，不能将尿酸降解成极易溶于水的尿囊 素只能经肾脏排泄绝大部分尿酸。尿酸浓度过高将导致高尿酸血症。高尿酸血 症患者可以有两种方法减少人体内尿酸和活性氧的形成：一是降低人体内次黄 嘌呤和黄嘌呤的含量，这可通过控制嘌呤类食物摄入来实现；二是降低人体内 黄嘌呤氧化酶的活性，这可通过抑制酶的活性来实现。因此，降尿酸药物在高 尿酸血症治疗中具有重要的地位。