[发明专利]一种利用贝肉制备ACE抑制肽的方法

说明书

本发明提供一种利用贝肉制备ACE抑制肽的方法，提高了酶的利用率和提取效率，使ACE抑制肽活性高，具有很好的降血压功效。本发明是通过利用枯草芽孢杆菌和黑曲霉对贝肉进行发酵，利用磁性碳微球辅助提高ACE抑制肽的活性和纯度，提高发酵速率，最后通过磁性二氧化硅吸附柱对ACE抑制肽进行纯化，得到产品。本发明制备的ACE抑制肽活性高，抑制率高，具有很好的降血压作用。

技术领域

本发明属于天然物质提取技术领域，特别涉及一种利用贝肉制备ACE抑制肽的方法。

背景技术

高血压（hypertension）是指以体循环动脉血压（收缩压和/或舒张压）增高为主要特征（收缩压≥140毫米汞柱，舒张压≥90毫米汞柱），可伴有心、脑、肾等器官的功能或器质性损害的临床综合征。目前，临床常用的降血压药物虽有很好的降压效果，但同时存在一些毒副作用和不良反应。

从高血压的发病机制看，无活性的血管紧张素I在血管紧张素转化酶（angiotensin I-converting enzyme，ACE)催化作用下转变为具有强血管收缩活性的血管紧张素II，降解血管舒缓激肽，使小动脉血管平滑肌收缩，从而导致血压升高。Oshima等从明胶的细菌胶原酶消化液中最早提取了食源性ACE抑制肽，可以有效抑制ACE活性，阻止血管紧张素II的生成，从而达到降血压的作用。此后，学者们对ACE抑制肽展开了广泛的研究，并在多种食物蛋白中发现了ACE抑制肽。来源于食物的ACE抑制肽降压效果显著，安全性高，无毒副作用，且成本低，易吸收，更符合患者的需求。

由于海洋生物生长环境的特殊性，从海洋生物中寻找降血压活性物质已成为海洋药物、海洋功能性食品研究的重要方向。蛤蜊是沿海地区常见的营养丰富且价格相对低廉的贝类产品，目前对蛤蜊ACE抑制肽多采用酶解法提取，以微生物发酵法生产蛤蜊ACE抑制肽的报道较少。

发明专利CN200710303512.5，连续酶膜反应制备马氏珠母贝降血压肽的方法，采用碱性蛋白酶水解马氏珠母贝肉和酶膜反应器，来制备马氏珠母贝降血压肽。其制备方法是：把马氏珠母贝肉粉碎制浆及加热变性，用水稀释得到反应液；将反应液连续加入酶膜反应器中，进行反应与分离，水解完成液连续透过膜流出酶膜反应器；将水解完成液喷雾干燥即得蛋白质水解收率为40～70％、IC50为0.3～0.6mg/ml的马氏珠母贝肉降血压肽产品。具有产品收率高，生产成本低，适合规模生产，产品达到一般功能食品的要求。

发明专利CN201610116627.2，一种利用纳豆菌发酵鲜贝肉制备降血压功能食品的方法，主体工艺包括鲜贝预处理、培养基配制与灭菌、纳豆菌菌悬液制备、液体发酵与后熟、冷冻干燥等工艺步骤。新鲜贝类清洗后蒸煮取肉，将肉切碎后经冷冻干燥、粉碎得贝肉干粉；按重量比1∶0 .1∶25分别加入贝肉干粉、蔗糖和蒸馏水配制培养基，并在灭菌锅中121℃灭菌15min；将适量活化后的纳豆菌种转入装有种子培养基的三角瓶中，制成108CFU·mL-1的种子菌悬液；在灭菌后的培养基中接入占培养基体积分数为5％的纳豆菌种子菌悬液，于45℃摇瓶液体发酵24小时，接着于4℃后熟24小时，再将发酵液进行冷冻干燥处理即得粉末状降血压功能食品。本发明工艺简便，可高值化利用贝类，产品可作为降血压功能食品使用。

现有技术中，酶法提取贝类ACE抑制肽方法较为成熟，但酶用量大，成本高；微生物发酵法成本低，ACE抑制肽得率高，但技术不成熟。

发明内容

针对现有技术中利用贝肉制备ACE抑制肽存在的不足，本发明提供一种复合菌发酵贝肉制备ACE抑制肽的方法。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种利用贝肉制备ACE抑制肽的方法，包括以下步骤：

A.取新鲜贝肉蒸煮切碎后，置于-20℃冰箱冷冻，6h后转入真空冷冻干燥机中，冷冻干燥48h，粉碎过40目筛得贝肉干粉；